175049. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új BU-2231 jelű glikopeptid-antibiotikum-komplex, az egyes komponensek és származékok előállítására
13 175049 14 Egy, mind Bu—2231 A-t, mind B-t tartalmazó minta réztartalma az atomabszorpciós spektrometriás meghatározás szerint kb. 3%. Az egyes komponensek ultraibolya abszorpciós maximumhelyei, a maximumok nagysága, valamint a komponensek optikai forgatóképessége a következő: UV-elnyelés Vegyület X H20 (mp) Ej^m [a]“ max (c = 0,5, H20) Bu-2231 A (rézkomplex) 243 (125), 291 (98) +50° Bu-2231 A (rézmentes) 235 (váll), 290 (67)-21° Bu-2231 B (rézkomplex) 243 (134), 291 (109) +76° BU—2231 B (rézmentes) 235 (váll), 289,5 (77)-19° Bleomicin A2 (rézkomplex) 242 (149), 291 (121)Fleomicin (rézkomplex) 244 (138), 301 (49) +84,5° (irodalmi adatok) A Bu-2231 két abszorpciós maximumánál mérhető UV-elnyelés arányából (a 240 mp-nál és 290 mp-nál mért elnyelések hányadosa: 1,2—1,3) arra lehet következtetni, hogy az új komplex a bleomicinszerű antibiotikumok csoportjához hasonlít és nem a fleomicinekhez. A Bu—2231 A rézmentes sósavas sójának, továbbá a Bu—2231 B rézmentes hangyasavas sójának infravörös és magmágneses rezonanciaspektrumát az 1—4. ábrán mutatjuk be. Ninhidrin reagenssel mindkét antibiotikum-komponens pozitív reakciót ad. A Bu—2231 komponensei szerkezeti sajátságai A fent leírt fizikai kémiai tulajdonságok arra utaltak, hogy a Bu-2231 A és B szerkezetileg közel áll a bleomicinhez. A két komponens egy-egy rézmentes mintáját, valamint egy bleomicin A2 mintát zárt csőben 20 órán át 105 °C-on hidrolizáltunk 6 normál sósavoldattal. Nagyfeszültségű papír-elektroforézissel hasonlítottuk össze a hidrolizátumokat. Ninhidrin-reagensoldattal, valamint UV-lámpa alatt lokalizáltuk az aminosavak foltjait. Amint a 8. táblázatból látható, a papír-elektroforézissel a bleomicin A2-nek mind a hat, az irodalomban leírt [J. Antibiotics 21, 79 (1968)] aminosav-alkotóelemét (1—VI) és egy armn-komponensét (VII) azonosítottuk. A Bu-2231 A és B hidrolízis termékei között azonosítottuk a bleomicin A2 1, II, IV és V képletű aminosav-alkotóelemének megfelelő, ninhidrinnel festődő sávokat, és a Bu—2231 A-ból és B-ből izolált négy aminosav- I-alkotóelemnek a bleomicin A2 I, II, IV. és V II képletű aminosav-alkotóelemével való azonosságát kémiai és spektroszkópiai úton igazoltuk. A bleo- 50 III micin A2 III képletű aminosav-alkotóeleme a (13,5 cm-nél található sáv) nem volt kimutatható a IV Bu—2231 A-ban és B-ben, ez utóbbiak tartalmaz- V tak viszont még egy, ninhidrinnel festődő zónát VI 14,8 cm-nél. Meghatározásunk szerint ezen amino- 65 sav szerkezete a VIII képlettel adható meg, tehát 25 ez a 4-amino-3-hidroxi-valeriánsav, amely a III képletű aminosav demetil analógja. A bleomicin A2 VI képletű aminosav-alkotóeleme (a 8,5 cm-nél található sáv, UV-abszorpciós maximuma: 290 mp-nal) nem volt kimutatható a 30 Bu-2231 A-ban és B-ben. Ezzel szemben izoláltunk a Bu—2231 A és B savas hidrolizátuniából egy csapadék formájában kinyerhető, savas jellegű komponenst (IX), amelynek UV-abszorpciós maximuma 283 inja hullámhossznál van (E}'?£ = 280). 35 A bleomicin A2 láncvégi amin-komponense (a 8. táblázat VII képletű vegyülete) a 31.5 cm-nél található sávban jelent meg. A Bu-2231 A és B hidrolizátumának elektroforézise során ugyancsak megjelenik egy sáv ugyanott, ahová a bleomicin A2 40 VII képletű amin-komponense fut. azonban a bleomicin antibiotikum-komplexben előforduló többféle aminovegyulet mozgékonysága hasonlónak mutatkozik ebben az elektroforetizáló rendszerben. A további vizsgálat kimutatta, hogy a Bu-2231 A és B 45 láncvégi amin-komponense spermidin (X). azonos a bleomicin As komponensével. Ezenkívül a Bu—2231 A hidrolizátumában volt még egy ninhidrinnel festődő sáv 23,0 cm-nél, amely nem volt kimutatható a bleomicin A2-ben és a Bu-2231 B- 50 -ben. Ezen alkotóelem a ß-lizin (XI képlet). A fent leírt aminosavak és armnovegyületek szerkezete a következő: A bleomicin A2, valamint a Bu- 2231 A és B 55 aminosav- és amin-alkotóelemei L-treonin. /3-amino-j3-(4'-amino-6’-karboxi-5’-meti]-pirimidin-2’-il)-propionsav, 4-amino-3-hidro\i-2-metil-n-valeriánsav, ß-hidroxi-hisztidin, L-ß-amino-alanin, 2-[( 2 ’-ß-aminoet il)-tiazol -4’-il ]-tiazoM-karbonsav, 7
