175033. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és eszköz humán korion gonadotropin fokozott termelésével járó rákos megbetegedések kimutatására, valamint terhesség meghatározására
5 175033 6 reagenstartállyal, amely a HCG vagy /3-szubegysége immunológiai meghatározásához szükséges reagens tárolására van adaptálva. Végül a kamra el lehet látva egy olyan eszközzel, amely lehetővé teszi a HCG-t tartalmazó vizelet- vagy vérszérum-koncentrátum és az előbb említett reagens közötti reakció megfigyelését. A találmány szerinti eszköz egy előnyös kiviteli alakja a kamrában elhelyezett olyan szűrőt tartalmaz, amelynek feladata a vizelet szűrése. Közelebbről, a korábban említett „molekulasúly szerinti szelektivitás” kifejezés alatt egy ultraszűrésre alkalmas membránnak azt a képességét értjük, hogy képes azon molekulák 80—100%-át visszatartani, amelyeknek molekulasúlya azonos vagy nagyobb a membránhoz rendeknél, ugyanakkor lehetővé teszi a kisebb molekulasúlyú molekulák zavartalan átjutását. A „téves pozitív” kifejezés alatt olyan, látszólag pozitív kísérleti eredményt értünk, amelynek esetében más módszerekkel egyértelműen kimutatható, hogy az eredmény tulajdonképpen negatív. A „menzesz várható napja” alatt az utolsó menzesz első napja utáni 28. napot értjük. A gonadotrop hormonok kémiájában jártas szakemberek számára nyilvánvaló az a tény, hogy a HCG /3-szubegységének immunológiai meghatározása attól függetlenül lehetséges, hogy a /3-szubegység különvált a HCG-molekulától vagy pedig még benne foglaltatik. A találmány célja szempontjából a /3-szubegység bármely formában való kimutatása eredményt jelent. Miként említettük, a találmány szerinti terhességmeghatározási eljárás első lépése egy vizelet- vagy vérszérumminta ultraszűrés útján történő koncentrálása. Vizelet koncentrálása esetén célszerűen az ébredés utáni első vizeletből vett mintát használunk. Az ultraszűrést egy ultraszűrő membrán alkalmazásával hajtjuk végre. E célra alkalmas ultraszűrő membránokat ismertetnek többek között Blatt, W. F. a „Methods in Enzimology” 22. kötetében (a könyv Jakoby, W. B. szerkesztésében az Academic Press, New York és London, kiadó gondozásában 1971-ben jelent meg); Poliak, V. E. és munkatársai a J. Láb. Clin. Med., 71, 338 (1968) irodalmi helyen; Blatt, W. F. és munkatársai a Nature, 216, 511 (1967) és Science, 150, 224 (1965) irodalmi helyeken; valamint a 3 549 016 és 3 615 024 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásokban. Az alkalmas ultraszűrő membránok közé tartoznak az úgynevezett anizotrop aromás polimer típusúak, például az Amicon Corp. amerikai egyesült államokbeli cég által gyártott Diaflo PM—10, Diaflo PM-20 és Diaflo PM—30, továbbá a Dorr—Oliver (Stamford, Connecticut állam) amerikai egyesült államokbeli cég által gyártott Iopor AP és Iopor XP; az anizotrop cellulózszerű típusúak, például az Abcor Inc. (Cambridge, Massachusets állam) amerikai egyesült államokbeli cég által gyártott HFA—100 és HFA—200, továbbá a Millipore Corp. (Bedford, Massachusetts állam) amerikai egyesült államokbeli cég által gyártott PSED; valamint például a Dupont Chemicals (Wilmington, Delaware állam) vagy Union Carbide (New York City) amerikai egyesült államokbeli cégek által gyártott gélcellofán. Az előzőekben említett folyadékminták ultraszűrés útján való koncentrálására módszert és berendezést ismertetnek a fent felsorolt, ultraszűrő membránokat ismertető szakirodalmi publikációk. Ultraszűréssel koncentráló berendezésre különösen kedvező kialakításokat ismertetnek Zipilivan, E. M. és munkatársai a 3 817 379 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban. Ez a szakirodalmi publikáció különösen fontos referencia teljes teijedelmében a találmány szerinti eljárás első lépésének megvalósítása szempontjából. Miként említettük, a találmány szerinti eljárás második lépése a HCG kimutatása a koncentrált mintában. Koncentrált vizelet- vagy vérszérummintákban a HCG kimutatására szolgáló előnyös tesztmódszerek az immunológiai módszerek, amelyeket itt agglutinációs és agglutinációs-inhibíciós tesztként említünk. Az agglutinációs tesztek [lásd például: Fink, H és Frie, A.: Obstet. Gynecol., 28, 660 (1966)] a HCG és egy HCG-antitest közötti direkt reakción alapulnak. Az agglutinációs-inhibíciós tesztek HCG-antiszérum és HCG egy hordozón, például vörösvérsejteken vagy latex-részecskéken végbemenő reakciójának inhibeálásán alapulnak. Ha az utóbb említett tesztben vörösvérsejteket alkalmaznak, akkor ez a teszt az angolszász szakirodalomban , Jiaemagglutination inhibition test” néven ismeretes, ha viszont látexet, akkor „lates agglutination inhibition test” néven. Ezen tesztek megismerhetők például Wide, L. és Gemzell, C. A.: Acta Endocrinol., 35, 261 (1960); Hobson. B. M.: J. Repród. Fért., 12, 33 (1966), illetve az ebben a publikációban közölt szakirodalmi referenciák; és Hibbard, B. M.: Brit. Med. J„ 1, 593 (1971) szakirodalmi helyekről, valamint a 3 548 051, 3 551 555 és 3 666 421 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásokból. A fentiekben ismertetett tesztekhez szükséges HCG-antitest ismert anyag. Az antitest előállítását több helyen ismertették. Lásd például Wide és Gemzell előző bekezdésben ismertetett publikációját, továbbá Midgley, A. R. és munkatársai publikációját: [Proc. Soc. Exp. Bioi. Med., 108, 85 (1961)]. Kívánt esetben a HCG kimutatható úgy is, hogy a HCG /3-szubegységére specifikus antiszérumot használunk [Vaitukaitis, J. és munkatársai: J. Clin. Endocrinol., 33, 988 (1971) és Amer. J. Obstet. Gynecol., 113, 751 (1972)]. Ha a HCG /3-szubegységére specifikus antiszérumot használjuk, akkor természetesen maga a /3-szubegység jelenlétét, valamint az intakt HCG jelenlétét észleljük. (Jól ismert, hogy a HCG /3-szubegysége készségesen elválik, vagyis disszociál a HCG-től.) Vizelet- és vérszérummintákban a HCG kimutatására kereskedelmi forgalomban vannak már vizsgálókészletek (úgynevezett test kit-ek), például a haemagglutinációs-inhibíciós teszt végrehajtására alkalmas vizsgálókészletek, így az Organon holland cég által „Pregnosticon All-in” néven vagy a Wampole Laboratories (Stamford, Connecticut állam) amerikai egyesült államokbeli cég által „UCG” márkanéven forgalomba hozott vizsgálókészlet; a látex agglutinációs-inhibíciós teszt végrehajtására alkalmas vizsgálókészletek, így az Organon cég által „Planotest” és „Pregnosticon Dri-Dot” márkanéven, az Ortho Pharmaceuticals (Raritan, New Jersey állam) amerikai egyesült államokbeli cég által „Gravindex” márkanéven és a Burroughs Wellcome nagy-britanniai cég által „Prepurex” vagy „Prepurin” márkanéven forgalomba 3 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
