174900. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új lizolipin antibiotikum és komponensei előállítására
9 174900 10 A 40-47. frakció aceton/éter elegyből 416 mg sötétsárga lizolipin I kristályt képez, olvadáspont 260-262 0 (bomlás). A további kémiai, fizikai és biológiai tulajdonságokat a leírás általános részében ismertettük. A kristályosítási anyalúgból és a szomszédos frakciókból SephadexR LH-20 oszlopon végzett ismételt kromatográfiával további 360 mg kristályt nyerünk ki. 4. példa 300 mg lizolin I-t 10 ml piridinnel és 10 ml ecetsavanhidriddel 2 hétig szobahőmérsékleten állni hagyunk, majd az oldatot vákuumban bepároljuk. A maradékot 30 g szilikagélen kloroform/etil-acetát (4 :1) eleggyel kromatografáljuk. Az első 150 ml eluátum 48 mg nem egységes anyagot tartalmaz. A következő 210 ml 220 mg halványsárga olajos anyagot eredményez, amely rétegkromatogramon (szilikagél, etil-acetát oldószer, megfestés jódgőzzel) egy 0,33 Rf-értékű főfoltot és két gyenge szennyezést mutat. Aceton/víz elegyből lassú kristályosítással halványsárga kristályprizmák válnak ki, 216-224 ° közötti, nem éles olvadásponttal. Az NMR-spektrumot CDCl3-ban (100 MHz) a 6. ábra mutatja. A próba még némi etil-acetátot tartalmaz (a kromatográfiából), ami az NMR-spektrumban megmutatkozik. A tömegspektrum (3. táblázat) alapján az anyag triacetát. Ha az acetilezést a szokott módon csak éjszakán át folytatjuk, két termék - valószínűleg egy monoacetát és a diacetát — elegyét kapjuk, amely kristályosítással nem választható szét. Az elegy tömegspektrumában a 683 és 681 tömegegységnél kapott jelek (diacetát M+-je) lényegesen kisebb intenzitással jelentkeznek. 5. példa A 2. példa szerint kapott nyersterméket Craig-készülék segítségével, 190 lépcsőben szén-tetraklorid (3,42 liter)-kloroform (2,28 liter)-víz (1 liter) oldószerrendszerrel extraháljuk. A sötétsárga színű, 26—54. frakció főleg lizolipin I-t tartalmaz. Az utóbbit úgy izoláljuk, hogy a frakciókat kétszeres térfogatú vízzel hígítjuk, a szerves fázist elválasztjuk, a vizes fázist metilén-kloriddal háromszor kirázzuk, a szerves fázisokat egyesítjük, nátrium-szulfáttal szárítjuk és vákuumban bepároljuk. 258 mg, rétegkromatográfiásan egységes lizolipin I-t kapunk, melyet SephadexR LH—20 oszlopon kromatografálva és a fentebb leírtak szerint átkristályosítva továbbtisztítunk, A 76—100. frakcióból hasonló feldolgozással csaknem színtelen, amorf port (393 mg), lizolipin X-et kapunk, amely kristályosítással nem tisztítható. NMR- és UV-spektruma a 7. és a 8. ábrán látható. Szilikagél-rétegkromatogramon kloroform/metanol (39 :1) elegyet használva Rf-értéke 0,22 (a lizolipin I-é 0,39). A rétegkromatogramon a kezdetben nagyon halvány, alig felismerhető lizolipin X folt levegőn állva - melegítve gyorsabban - sötétsárga színű lesz. A foltot eluálva és újrakromatografálva azt tapasztaljuk, hogy a lizolipin X lizolipin I-vé alakult át. A lizolipin X egy mintáját metanollal Sephadex LH—20 oszlopon kromatografáljuk. Egy kezdetben halványsárga zóna a kromatografálás előrehaladtával egyre erősebb sárga lesz. A sárga eluátum-frakciókat rétegkromatográfiával lizolipin I-vel azonosnak találjuk. Egy kezdetben csaknem színtelen lizolipin X mintát több hónapig hűtőszekrényben tartunk. Ezalatt az idő alatt élénk sárga színű lesz. Craig-extrakcióval (lásd fent) a próbából még kismennyiségű lizolipin X nyerhető ki. Főtömegét lizolipin I-ként azonosítjuk. 1. táblázat Lizolipin I. 13C-NMR-spektrum (25,2 MHz). Oldószer: CDC13* + kevés DMSO Szám Ő (ppm) m Szám 5 (ppm) m 1. 181,26 s 15. 117,77 s 2. 168,26 s 16. 116,15 d 3. 158,60 s 17. 111,24 s 4. 151,26 s 18. 110,37 s 5. 149,65 s 19. 108,54 s 6. 144,95 s 20. 92,63 d 7. 143,17 s 21. 90,95 t 8. 140,53 s 22. 78,87 d 9. 138,86 s 23. 75,31 d 10. 134,06 s 24. 67,70 d 11. 133,09 s 25. 61,55 q OCH; 12. 127,91 s 26. 58,42 q OCH; 13. 125,48 d 27. 57,67 q OCH 14. 120,62 ? 28. 35,55 q 5: kémiai eltolódás tetrametilén-szilán belső standarddal szemben. m: felhasadás az „off-resonance’’-spektrumban. A 29 szénatomból 28 önálló jelként ismerhető fel. s = szingulett, d = dublett, t = triplet, q = kvartét. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
