174887. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gonococcus szálak előállítására
19 174887 20 módon összehasonlító vizsgálatokat végzünk szérum nélkül hígítószerrel és egészséges szérumot tartalmazó hígítószerrel. Azt találtuk, hogy a találmány szerinti eljárás körülményei között a teszt reprodukálhatósága kétszeres titerleolvasás értéken belül van. Az Amerikai Egyesült Államokban elterjedt 21 törzs vizsgálata alapján azt tapasztaltuk, hogy legalább négy immunológiai determinánst tartalmaznak ezeknek a törzseknek a szálai. A determinánsok közül egy vagy több mindegyik törzsben jelen van. Ezért, ha az illető minta determináns jellemzői azonosíthatók, a fertőzés eredete könynyebben megállapítható. Ha fertőzött személytől származó Neisseria gonorrhoeae organizmusokat tenyésztünk ki szál kristályok előállítása céljából, az így kapott kristályok ban megtalálható immunológiai determinánsok könnyen meghatározhatók, ha a találmány szerinti agglutinációs tesztnek vetjük alá őket olyan szérumok alkalmazásával, amelyekről tudjuk, hogy mindössze egy determinánsra tartalmaznak antitestet. Ilyen módon bármely adott organizmus szerológiai profilját megállapíthatjuk. Gonorrhea vakcina Tekintettel ezekre az adatokra, annak érdekében, hogy elfogadható védettségi szintet hozzunk létre az embereknél, megfelelő mennyiségben kell beadni a valamennyi ismert determinánst tartal- 5 mazó GC szál kristályokat, hogy az agglutinációs szint e determinánsok mindegyikével szemben legalább 100, célszerűen azonban legalább 200 legyen. Ezt a szintet úgy érhetjük el, hogy 2—100 mikrogramm/testsúly kg dózisban adjuk be az 10 egyes determinánsoknak megfelelő GC szál kristályokat. Megjegyezendő azonban, hogy a 100-as titer mindössze l/r.g/kg dózis beadásával elérhető. A beadás módja függ az illető személy esetleges érzékenységétől, célszerűen azonban 1-5 dózisban 15 adható be legfeljebb 8 hét alatt. A GC szál kristályok, a különálló szál pálcikák vagy más GC pilin források bármilyen, az intramuszkuláris injekciók készítéséhez alkalmas közegben adhatók be. 20 A kísérletekhez alkalmazott Neisseria gonorrhoeae törzsek Gonorrheával fertőzött emberekből többek kö- 25 zött az alábbi 21 Neisseria gonorrhoeae törzset különítettük el: A találmány szerint a gonococcus szálakat az injekciókészítésnél szokásos segédanyagok alkalmazásával, önmagában ismert módon, szubkután vagy 30 intramuszkuláris injekcióvá alakítjuk. GC szál kristályokat és különálló szál pálcikákat fecskendeztünk be in vivo, és azt tapasztaltuk, hogy nincsen toxikus hatásuk. Kedvezőtlen hatást egyedül csirke embriókba történt intravénás befecs- 35 kendezéskor figyeltünk meg. A kísérleti nyulak három szubkután injekciót kaptak 100—200 mikrogramm/kg dózisban, úgy, hogy a teljes adag 300—600 mikrogramm/kg volt. Patkányoknak hasonló módon két injekciót adtunk 8 mg/kg dózis- 40 ban, és a teljes adag 16 mg/kg volt. Rézusz-majmok három intramuszkuláris injekciót kaptak 100 mikrogramm/kg dózisban, a kísérletre vállalkozó emberek 2-10 mikrogramm/kg dózisú injekciókat kaptak intramuszkulárisan, majd egy injekció következett 45 50 mikrogramrd/kg dózissal. A kísérleti állatok közül egy sem pusztult el, és nem mutatott helyi vagy általános reakciót. A csirke embrióknál az LD50 érték 132 mikrogramm/kg volt. Embereknél nem lépett fel általános hatás, mindössze egy 50 személynél jelentkezett átmeneti megfázás és láz. Az agglutinációs titer nyulaknál 1000—8000 között volt, rézusz-majmoknál pedig a 10000 feletti értéket is elérte. Embereknél az agglutinációs titer 100—200 között változott. 55 A vizsgálati alanyok 50%-ának megfertőzéséhez szükséges dózis (ID50) 5,0 x 102 organizmus nagyságrendű. Az előzetes kísérletek azt mutatták, hogy a 100—200 agglutinációs titerű embereknél az 60 IDS0 érték 2,0 x 104 organizmus. Ez 1,6 log ciklus védelmet jelent, vagy másképpen kifejezve, a 100—200 közötti agglutinációs titerű személynél egy érintkezéskor a fertőzés valószínűsége 0,86%, míg az immunizálatlan személynél körülbelül 30%. 65 Pittsburgh 1—2 Atlanta 6—2 Pittsburgh 3-2 (ATCC 31149) Atlanta 9-2 Pittsburgh 4-2 (ATCC 31151) Atlanta 10-2 Pittsburgh 6—2 Seattle 1—2 Pittsburgh 7—2 Seattle 3—2 CDC B—2 Seattle 9-2 CDC-C-2 (ATCC 31207) Norfolk, 2-2 (ATCC 31208) CDC M—2 (ATCC 31148) Norfolk 7-2 CDC-T-2 (ATCC 31150) Dayton 8-2 CDC F62—2 CDC 005-2 (ATCC 31152) Atlanta 4—2 Valamennyi példában elsősorban a Pittsburgh 3—2 (ATCC 31149) törzsre hivatkozunk. Ha azonban a többi megnevezett organizmussal végezzük el ugyanezt a találmány szerinti eljárást, hasonló eredményekhez jutunk. 1. példa A mikroorganizmus törzs tisztítása A Pittsburgh 3-2 (ATCC 31149) törzs primer tenyészeteit Thayer-Martin-féle agar-agart tartalmazó Thayer-Martin lemezeken állítottuk elő. 10
