174887. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gonococcus szálak előállítására
7 174887 8 régebben fertőződött, és csupán antitesteket hordoz. Megjegyezendő továbbá, hogy igen friss (azaz az előző 2-3 nap folyamán bekövetkezett) fertőzés esetén esetleg nem kapunk pozitív vizsgálati eredményt, mivel a szervezetnek még nem volt elegendő ideje ahhoz, hogy olyan koncentrációban hozza létre az antitesteket, amelyben már kimutathatók. Vizsgálataink során megállapítottuk, hogy a Neisseria gonorrhoeae organizmusok szálai egy vagy több immunológiai determinánst tartalmaznak, ahol a determinánsok száma legalább négy lehet. Az antitest agglutinációs reakció tehát a szálak és valamely antitesteket tartalmazó szérum között megy végbe legalább egy immunológiai determinánssal szemben. A reakció erőssége egyformán függ a vizsgálati szérummintában fennálló antitest-koncentrációtól és az immunológiai determinánsok számától. így mód nyílik arra, hogy mondjuk négy különböző, legalább egy determinánst tartalmazó GC szál minta esetén gyorsan megvizsgáljunk bármilyen vizsgálati szérumot a megfelelő antitestek jelenlétére. Hasonló módon, ha az organizmusok rendelkezésre állnak, és könnyen tenyészthetők, elkülöníthetők a æâlak. Tekintettel arra, hogy a találmány alapján hozzáférhetők olyan standard szérumok, amelyek a GC szálak négy antigén determinánsa bármelyikével szemben antitesteket tartalmaznak, az ismeretlen vizsgálati mintából származó szálak szérumos vizsgálata elvégezhető a determinánsok fajtájára és számára vonatkozólag. Mindez jelentős mértékben elősegíti a gonorrhea fertőzés nyomonkövetésével kapcsolatos epidemiológiai munkát. A szálak megköthetők különböző, az immunológiai vizsgálatoknál alkalmazott hordozókon (ilyen például a latex, a kimosott vörösvérsejtek, aktív szén, poliakrilamid, agaróz, stb.) és ilyen formában is alkalmazhatók a szérum vagy plazma agglutinációs vizsgálatokhoz. A találmány szerint a GC szálak hemagglutinációs vizsgálatokhoz és hemagglutináció-gátló vizsgálatokhoz is alapul szolgálnak. Mindkét vizsgálat azon az elven alapul, hogy a szálak tartalmaznak olyan reakcióképes helyeket, amelyek kölcsönhatásba lépnek a vörösvérsejtekkel. Amikor tehát GC szálakat és vörösvérsejteket együttesen inkubálunk, a vörösvérsejtek diffúz agglutinálódott szemcsét adnak a nehézségi erő hatására fellépő ülepedéskor. Ha GC szálak nincsenek jelen a vizsgálati közegben, a vörösvérsejtek tisztán látható szemcsét adnak a nehézségi erő hatására bekövetkező ülepedéskor. Ilyen módon megállapíthatjuk valamely oldatban a GC szálak jelenlétét. A hemagglutináció-gátló vizsgálatnál meghatározott mennyiségű GC szálat tartalmazó oldathoz olyan vizsgálati szérumot adunk, amelyről feltételezzük, hogy a GC szálakkal szembeni antitesteket tartalmaz, majd az elegyet inkubáljuk és centrifugáljuk. Az antitestekkel kölcsönhatásba lépett szálak kicsapódnak. A folyadék tisztáját ezután vörösvérsejtekhez adjuk. Amikor az összes GC szál elreagált a vizsgálati anyagban jelenlevő antitestekkel, tisztán látható szemcse képződik (azaz nincs agglutináció). A szakember számára nyilvánvaló, hogy az ilyenfajta vizsgálatnak jelentősége van akkor, amikor antitesteket nem tartalmazó összehasonlítókkal szemben végzünk vizsgálatokat, továbbá előre meghatározott hígítások alkalmazása esetén. A teszt pontossága növekszik, ha a szérumot először (azaz a GC szálak hozzáadását megelőzően) kimosott vörösvérsejtekkel kezeljük. Ezáltal eltávolítjuk azokat a faktorokat a szérumból, amelyek a vörösvérsejtek agglutinálódását okoznák a GC szálak jelenlététől függetlenül. Mindeddig nem volt lehetőség emberek Neisseria gonorrhoeae organizmussal szembeni immunizálására. Azt találtuk, hogy amikor önkéntes kísérleti alanyokba elegendő mennyiségű GC szál kristályt fecskendeztünk be, célszerűen 2—100 mikrogramm/testsúly kg közötti dózisban, és ezáltal a kísérleti alanyok vérszérumának antitest szintje legalább 100-as agglutinációs titert ért el, a védelem mértéke legalább 1,6 log ciklus lett. Ez azt jelenti, hogy a kísérleti alany körülbelül 1,6 nagyságrenddel nagyobb mennyiségű organizmusnak volt képes ellenállni, mint amennyi fertőzést hozott létre az immunizálatlan kontroll személyeknél. (Természetesen az organizmusoknak ugyanahhoz a törzshöz kell tartozniuk, amelyből a befecskendezett GC szál kristályok származtak). A GC szál kristályok befecskendezését követően nem figyeltünk meg azoknak tulajdonítható toxikus hatást. Embereknél 200-as agglutinációs titerignem tapasztaltunk toxikus hatásokat, rézusz-majmokon körülbelül 10 000-es agglutinációs titerig nem léptek fel káros hatások. Megállapítottuk továbbá, hogy tanácsosnak látszik a GC szál kristályok befecskendezését, megfelelő vivőközeg alkalmazásával, kissé hosszabb időszak alatt többször megismételni. A kezelési idő célszerűen legfeljebb 5 hét. 1-5 alikvot részben adhatjuk be a GC szál kristályokat, a GC szál pálcákat vagy a GC pilint tartalmazó bármilyen anyagot. Előnyös, de nem elengedhetetlen az időben széthúzott beadási mód, amely lehetővé teszi, hogy az antitestek fokozatosan létrejöjjenek a szervezetben. Megjegyzendő továbbá, hogy kedvezőtlen helyi reakciót nem tapasztaltunk a kristályokkal szemben a befecskendezés helyén olyan kísérleti alanyoknál, akiknek egy korábbi időpontban már beadtuk a kristályokat. Tekintettel a fentebb említett különböző antitest determinánsok létezésére, célszerű olyan GC szál kristályok, GC szál pálcikák vagy más, GC pilint tartalmazó anyagok beadása, amelyek az ismert determinánsok mindegyikét tartalmazzák, hogy ilyen módon maximális védelmet érjünk el. A GC szál kristályok előállítása Neisseria gonorrhoeae organizmusok tenyésztése Felületi tenyészet A Neisseria gonorrhoeae négy különböző telepváltozatban található meg, amelyeket önkényes módon Ti, T2, T3 és T4 típusoknak jelölünk. Ez a jelölési mód azonban általánosan elfogadott. [J. Bacteriol, 85, 1274, 96, 596]. A Ti és T2 típusú 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
