174695. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gentamicin, sziszomicin és garamin előállítására
9 174695 10 Táblázat folytatása összes gentamicin antibiotikum és sziszomicin tartalom B) táptalaj + sziszomicinszulfát 1,8 gfl 140% + dezoxisztreptaminszulfát 1,0 g/1 135% + sztreptidinszulfát 1,2 gfl 115% + garaminszulfát 1,5 g/1 115% + purpurózaminszulfát 1,5 g/1 110% + kobaltklorid • 2H20 2,4 g/1 100% + mangán • 4H20 2,0 g/1 110% + rézszulfát • 5H20 2,4 g/1 100% A B/3 fermen tlevek, garamin tartalma is 10—35%-kal növekedett az A/3 fermentlé garamin tartalmához képest. Az inokulumok (B/l táptalajon) 48 órás korában a tenyészetek amiláz aktivitásai 8-12-szeresére, a proteáz aktivitásai 6—10-szeresére, a fermentáció 48. órájában (B/2 táptalaj) a tenyészetek amiláz aktivitásai 7-10-szeresére, a proteáz aktivitásai pedig 4-6-szorosára növekedtek, az A/3 táptalajokkal végzett kísérletekben kapott eredményekhez képest. 3. példa A Micromonospora echinospora NRRL-2985 törzs mélyhütve (-15 °C-on) tárolt vegetatív tenyészetéből olyan hígítást készítünk steril desztillált 25 vízzel, hogy a szuszpenzió élő csíra száma 103-104/ml legyen. Ennek a szuszpenziónak 1—1 ml-ével beoltjuk az 1. példa szerinti A / és B / szilárd táptalajokat. A B/ szilárd táptalajba - beoltás előtt - a következőket adagoljuk (1000 ml tér- 30 fogatra számolva): 0,2 g sztreptomicinszulfátot, 0,5 g dezoxisztreptaminszulfátot, 1,0 g sztreptidinszulfátot, és 0,8 g kobaltklorid • 2H2 O-t. Beoltás után az 1. példa szerint inkubáljuk a tenyészeteket és átoltjuk a megfelelő A/l-A/2, illetve B/l-B/2 35 inokulum és fermentációs táptalajokba. A fermentációs kísérleteket is hasonlóan vitelezzük ki, mint az 1. példában. Mérési eredmények: Inokulum 48 ó Fermentáció 48 ó amiláz proteáz amiláz proteáz m-SKB/ml p-A/ml m-SfCB/ml p-A/ml táptalajokon kifejlődött A/ tenyészetek enzim aktivitása táptalajokon kifejlődött B/ tenyészetek enzim aktivitása A fermentáció befejezésekor az A/3 fermentlé összes gentamicin antibiotikum tartalma 130 E/ml, a B/3 fermentlé 220 E/ml. 4. példa A Micromonospora grisea NRRL-3800 törzs mélyhütve (—15 °C-on) tárolt vegetatív tenyészetéből olyan hígítást készítünk steril desztillált vízzel, 5 120 8 150 30 700 110 900 hogy a szuszpenzió élő csíra tartalma 103-104/ml legyen. Ennek a szuszpenziónak 1-1 ml-ével beoltjuk a következő összetételű szilárd táptalajokat: Cl Élesztőkivonat 5,0 g, szacharóz 30,0 g kál- 60 ciumkarbonát 1,0 g, desztillált víz 1000 ml, agar 20,0 g, pH = 7,0. Dl A Cl táptalajhoz adagolunk 0,2 g sztreptomicinszulfátot, 0,5 g dezoxisztreptamint és 1,0 g kobaltklorid * 2H20-t. A törzset a Dl táptalajon 6 65 alkalommal átoltjuk. 5
