174606. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tripeptidek előállítására
15 174606 16 50 mg L-2-keto-piperidin-6-karbonil-L-hisztidil-L-tiazolidin-4-karboxamidot és 10 mg L-borkősavat 0,2 ml vízben oldunk. A vizes oldathoz 1,2 ml abszolút etanolt adunk, az elegyet jéggel az olaj kristályosodásáig hűtjük, majd szárazra pároljuk és a maradékot abszolút etanollal eldörzsöljük. 46,5 mg szemcsés amorf kristályos borkősavas sót kapunk. Elemzési adatok a C20H28N6Oi 0S-képlet alapján számítva: 6. példa számított: C =44,11% H = 5,18%, C =15,44%, talált: C =44,01%, H =5,52%, N = 15,23%. 7. példa A lépés: terc-butoxikarbonil-(DNP)-hisztidil-szukcinimid észter előállítása 4,21 g (10 mmól) terc-butoxikarbonil-hisztidin és 1,15 g (10 mmól) N-hidroxiszukcinimid 24 ml tetrahidrofuránnal készített oldatát jeges-vizes fürdőben lehűtjük, majd 2,27 g (11 mmól) diciklohexil-karbodiimidet adunk hozzá. A kapott elegyet 2.5 órán át 5 C-on tartjuk. Az elegyet szüljük, a szűrletet bepároljuk, majd a koncentrátumhoz két részletben étert adunk. A kapott gyantásodé szilárd anyag iR-spektruma kis mérvű diciklohexil-karbodiimid szennyezettséget mutat. A nyers terméket 20 ml metiléndikloridban oldjuk, szűrjük és ciklohexánból átkristályosítjuk. A zavaros felső réteget leöntjük és a maradék olajat (5,06 g) vákuumban súlyállandóságig szárítjuk. B lépés: terc-butoxikarbonil-(DNP)-hisztidil-tiazolidin-4-karbonsav előállítása 16,1 g (0,121 mól) tiazolidin-4-karbonsav és 62.5 g (0,121 mól) A lépés szerint előállított termék 400 ml dimetilformamiddal készített szuszpenziójához 7 óra alatt részletekben 24 ml (0,165 mmól) trietilamint adunk, mellyel a reakcióelegy pH-ját 7,2-7,6 értékre állítjuk be. A reakcióelegyet mágneses keverővei szobahőmérsékleten 24 órán át kevertetjük, és a kapott oldatot vákuumban bepároljuk. A kapott sűrű olajat 1 liter metiléndikloridban oldjuk, majd 2-szer 500 ml vizes citromsav-oldattal és 2-szer 500 ml vízzel extraháljuk. A metilénkloridos fázist vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk, szüljük és a szűrletet bepároljuk. 63 g mézgaszerű anyagot kapunk. terc-butoxikarbonil-(DNP)-hisztidil-tiazolidin-4-karbonsav-ammóniumsó előállítása A B. lépés termékét koncentrált ammónium-hidroxid-oldatban oldjuk, majd liofilizáljuk. 56,9 g (85%) dipeptid-ammóniumsót kapunk. 1 D lépés: terc-butoxikarbonil-(DNP)-hisztidil-tiazolidin-4-karbonsavamid előállítása 29,59 g (0,0525 mól) nyers Boc-(DNP)-His-Tca-ONH4, 12,3 g (0,08 mól) hidroxi-benztriazol-hidrát és 14,3 g (0,267 mól) ammónium-klorid 250 ml metiléndikloriddal készített szuszpenziójához, szobahőmérsékleten 15 g (0,073 mmól) diciklohexil-karbodiimid 45 ml metiléndikloriddal készített oldatát adjuk. Az elegyet mágneses keverővei kevertetjük, majd 13,8 ml (0,095 mól) trietilaminnal pH = 7,2 értékre lúgosítjuk. A kapott elegyet 1,5 órán át állni hagyjuk. A szuszpenziót szűrjük, a szűrlet térfogatát metilénkloriddal 1,5 1-re egészítjük ki, majd 3-szor 350 ml vízzel extraháljuk. A metiléndikloridos fázist vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk, szüljük, majd a szűrletet bepároljuk. A nyers terméket metiléndikloridból petróleum-éterrel 3-szor átkristályosítjuk. A kapott 28,4 g termék Boc(DNP)-His-NH2 és diciklohexilkarbamid szennyeződést tartalmaz. A . nyers dipeptid-amidot kis mennyiségű 90:10:0,5 térfogatarányú kloroform-izopropilalkohol-víz-elegyben oldjuk, az oldatot 2,2 kg szilikagéllel töltött oszlopra visszük fel, és az oszlopot a fenti oldószer-eleggyel eluáljuk. Az eluátum első 3,4 literét elöntjük, majd minden 45 percenként 70 ml frakciót gyűjtünk. A 72-182. frakciókat egyesítjük, majd súlyállandóságig bepároljuk. 12,95 g (46,3%) Boc—(DNP)-His-Tca-NH2-t kapunk. A 45-70. és 183—237. frakciókból 3,12 g (11,1%) termék nyerhető, mely nyomokban szennyeződéseket tartalmaz. E lépés: (DNP)-hisztidil-tiazolidin-4-karbonsavamid-hidroklorid előállítása 1 literes keverővei és gázbevezető csővel ellátott gömblombikba 12,7 g (0,0237 mól) Boc—(DNP)—His—Tea—NH2 318 ml etilacetáttal készített oldatát mérjük be. Az oldatot -25 °C-ra hűtjük, majd 5 percig állandó keverés közben az oldatban hidrogénklorid gázt vezetünk keresztül. A sósavgáz feleslegének eltávolítására a készüléken 0 °C-on 5 percig nitrogén áramot vezetünk keresztül. A kapott szuszpenzióhoz 600 ml petróleum-étert adunk, a keveréket szűrjük és a kapott szilárd anyagot éterrel mossuk. A kapott 11,9 g terméket 2 órán át vákuumban szárítjuk és a következő lépéshez közvetlenül felhasználjuk. C. lépés: 5 10 IS 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
