174539. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új BU-2183 antibiotikumok előállítására
11 174539 12 tilis PCI 219-et használva határozzuk meg. A rázott lombikos fermentációs módszerrel a D946-B83 jelű törzs 1500—2000 mikrogramm/ml antibiotikum-komplexet termel. Miután az antibiotikum-koncentráció a ferment- 5 lében elérte az optimumot (például a fent említett értékmérés alapján), a ferementlé pH-ját 2 körüli értékre állítjuk be, ezáltal a bázikus jellegű antibiotikum-komplex leválik a micéliumról, és beoldódik a vizes fermentlébe. Ezután, előnyösen valamely 10 szűrési segédanyag alkalmazásával, megszűrjük a fermentlevet, majd 7-es körüli pH-értékre semlegesítjük a szűrletet. Kationcserélő gyantán, előnyösen ammónium-fázisú IRC-50 Amberlite-gyantán vezetjük át a semlegesített szűrletet. Vízzel és híg (0,02 15 normál) a mmónium-hidroxid-oldattal mossuk a gyantát, majd valamely alkalmas eluenssel, például 0,5 normál ammónium-hidroxid-oldattal eluáljuk az antibiotikum-komplexet a gyantáról. Egyesítjük az aktív elirtumokat, csökkentett nyomáson betö- 20 ményítjük, majd ledesztilláljuk, vagy liofilizálással eltávolítjuk az oldószer maradékát, ily módon nyers Bu-2183 antibiotikum komplexet nyerünk. Az így nyert nyers szilárd halmazállapotú termék a vékonyréteg-kromatográfiás vizsgálat szerint 25 legalább három aktív komponenst, a Bu—2183A-Í, A2-t és B-t, továbbá az inaktív komponenst, a Bu—2183 D-t tartalmazza. A Bu—2183 komplexet kationcserélő gyanta, előnyösen egy ammónium-fázisban levő Amberlite CG— 50-es típusú gyanta 30 segítségével a komplexet összetevő Bu—2183 A, Aj, B és D komponensekre választhatjuk szét. Vízben oldjuk a komplexet, fel visszük a gyantára, vízzel és lúg (0,025 normál) ammónium-hidroxidoldattal mossuk a gyantát, majd megfelelő eluenssel eluáljuk. 0,05 normál ammónium-hidroxidoldattal eluálva választhatjuk szét a Bu—2183 At- és a B-t. Töményebb, például 0,1 normál ammónium-hidroxidoldattal tovább eluálva az oszlopot, kinyerhetjük a ninhidrin-pozitív, de biológiailag inaktív Bu—2183 D-t. A tiszta Bu—2183 Aj komponens kinyerésére általában oszlopkromatográfiás úton tovább kell tisztítani a Bu—2183 A frakciót, és így szétválaszthatjuk a Bu-2183 Aj és a Bu-2183 A komponenseket. A fent leírt kromatográfiás elválasztási eljárás megismétlésével minden komponenst teljesen szétválaszthatunk és megtisztíthatunk. Amint ezt az alábbi 4. táblázat mutatja, az itt S-117 és S—122 jelzéssel ellátott vékonyrétegkromatográfiás oldószerelegyek alkalmazásával megkülönböztethetjük a Bu-2183 A, B és D komponenseket. A Bu-2183 A komponensnek az alább következő példákban részletesen leírt kromatográfiás tisztítása során egy további, biológiailag aktív, itt Bu—2183 A2-nek nevezett aminoglikozid•komponenst izolálhatunk. Az S-117 és S-122 jelű vékonyrétegkromatográfiás oldószerelegyek segítségével a Bu-2183 A2 komponenst megkülönböztethetjük a Bu—2183 A komponenstől, amint ezt az 5. táblázat bemutatja. 4. táblázat A Bu-2183 komponensek vékonyrétegkromatográfiás Rf-értékei Futtató rendszer Adszorbens Oldószerelegy A Rfx B C D S-117 szilikagél kloroform-metanol-28%-os ammónium-hidroxid (1 : 3 : 2) 0,39 0,30 0,21 0,23 S-122 szilikagél kloroform-metanol-2 normál ammónium-hidroxid-ecetsav (20 : 65 : 40 : 5) 0,38 0,27 0,15 0,03 x Előhívó reagens: ninhidrin 5. táblázat A Bu-2183 A és Aj komponens vékonyrétegkromatográfiás Rf-értéke Futtató rendszer Adszorbens Oldószerelegy A RfX Aí S-117 szilikagél kloroform-metanol-28%os ammónium-hidroxid (1 :3 :2) 0,49 0,57 S-122 szilikagél kloroform-metanol-2 normál ammónium-hidroxid-ecetsav (20 : 65 : 40 : 5) 0,39 0,48 x Előhívó reagens: ninhidrin 6
