174299. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kérődzők tápanyaghasznosításának fokozására alkalmas A-28 086 jelű antibiotikum A vagy D jelű összetevőit tartalmazó szarvasmarha-takarmány előállítására
21 174299 22 A Streptomyces aureofaciens NRRL 5758 törzs által termelt A 28 086 komplex elkülönítése. Az 1. példában megadottak szerint előállított, 132 liter térfogatú teljes tenyészlevet szűrési segédanyag (Hyflo Super-ral, diatomaföld, Johns-Manville Products Corp.) jelenlétében szűrünk, amikor 97 liter szűrletet kapunk. Ezt közelítőleg azonos térfogatú etil-acetáttal extraháljuk. Elkülönítjük a vizes fázistól a szerves oldószeres extraktumot, és körülbelül 500 ml térfogatúra töményítjük. Ezt a tömény etil-acetátos sűrítményt fölös mennyiségű petroléterhez (Skelly Solve F, 10 liter), adjuk, amikor csapadék válik ki az oldatból, amit elkülönítünk. A szűrletet csökkentett nyomáson desztilláljuk, amikor desztillációs maradékként megkapjuk a 6,9 g súlyú, eredetileg a fermentlé folyékony halmazállapotú részében levő A 28 086 komplexet. Az A 28 086 komplex micéliumon levő részének elkülönítésére a szűrési maradékként kapott micéliumot kétszer, közelítőleg fél térfogatnyi, 62 liter és 59 liter metanollal extraháljuk. Egyesítjük a két metanolos extraktumot, majd a metanol eltávolítására csökkentett nyomáson desztilláljuk. A desztilláció után 10 liter vizes fázis marad hátra. Ennek pH-ját híg nátriumhidroxid oldattal 7,5-re állítjuk be. Kétszer, körülbelül azonos térfogatnyi, 9 liter és 10 liter etil-acetáttal extraháljuk az oldatot, egyesítjük az extraktumokat, majd körülbelül 400 ml térfogatúra töményítjük. A tömény etil-acetátos extraktumot a szennyezőanyagok eltávolítására, a tömény szűrlet kapcsán ismertetett eljárást megismételve nagy fölöslegű petroléterhez öntjük. A szűrletből 20,6 g, eredetileg a micéliumon levő A 28 086 komplexet kapunk. 3. példa 4. példa Az A 28 086 komplex A és B komponenseinek elkülönítése. A 3. példában megadott eljárással előállított, 235 g súlyú, eredetileg a micéliumon levő A 28 086 antibiotikum-keveréket 80 ml benzolban oldunk. A benzolos oldatot 9 x 130 cm méretű, 8 liter Matheson grade 62 szilikagéllel töltött kromatografáló oszlopra töltjük. Az oszlopot különböző benzol-etil-acetát elegyekkel eluáljuk. Az eluációt vékonyrétegkromatográfiával ellenőrizzük. 90:10 arányú benzol és etilacetát elegyével végezve az eluálást, először a B jelű vegyület eluálódík, és izolálható tisztán. A 43 mg súlyú A 28 086 B-t aceton és víz elegyéből kikristályosítsa 150—153 °C olvadáspontú terméket kapunk. Az eluálást fokozatosan növekvő mennyiségű etil-acetátot tartalmazó benzol-etil-acetát eleggyel folytatjuk, amikor az A 28 086 A eluálódik. Az A komponenst tartalmazó frakciókat egyesítjük, és csökkentett nyomáson desztilláljuk. A száraz desztillációs maradékot 150 ml acetonban oldjuk, majd 150 ml vizet adunk az acetonos oldathoz. Az így kapott oldat pH-ját 1 n hidrogénklonü oldattal 3-ra állítjuk be. Egy órán át keverjük a savas elegyet, ami alatt csapadék válik ki belőle. Szűréssel elkülönítjük a csapadékot, és 150 ml acetonból 60 ml víz hozzáadása után kikristályositjuk. Egy éjszakán át csökkentett nyomáson szárítjuk a terméket, amikor 6,6 g 4 28 086 A komponenst kapunk. A szűrletből részlegesen eltávolítjuk az acetont, amikor további 1,2 g A 28 086 A-t kapunk. 5. példa Az A 28 086 A-acetil-észter előállítása 7,4 g A 28 086 A-t 150 ml piridinben oldunk. 50 ml ecetsav-anhidridet adunk az oldathoz, majd erőteljesen összekeverjük az elegyet, és egy éjszakán át szobahőmérsékleten hagyjuk állni. 200 ml vizet adunk a reakcióelegyhez, és erőteljesen összekeverjük. 4 órán át szobahőmérsékleten hagyjuk állni az elegyet, amikor fehér színű csapadék válik ki. Ezt szűréssel elkülönítjük, vízzel mossuk, és levegőn szárítjuk. Az így kapott szilárd halmazállapotú terméket 100 ml acetonban oldjuk, az acetonos oldatot csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. Ezt háromszor megismételjük. A desztillációs maradékot 100 ml aceton és 50 ml víz elegyéből kikristályosítjuk, amikor 6,14 g, 100-103 °C olvadáspontú A 28 086 A-acetil-észtert kapunk. 6-9. példa Az 5. példában megadott eljárást ismételjük meg, azzal a különbséggel, hogy piridin jelenlétében az A 28 086 A-t j>ropionsav-anhidriddel reagáltatjuk, amikor 96—98 C hőmérsékleten olvadó A 28 086 A-propionil-észtert kapunk. Az 5. példában megadott eljárást ismételjük meg, azzal a különbséggel, hogy piridinnel készült reakcióelegyben az A 28 086 A-t n-vajsav-anhidriddel reagáltatjuk, amikor 79-81 °C hőmérsékleten olvadó A 28 086 A-n-butiril-észtért kapunk. Az 5. példában megadott eljárást ismételjük meg, azzal a különbséggel, hogy piridinnel készült reakcióelegyben az A 28 086 A-t kapronsav-anhidriddel reagáltatjuk, amikor 163—167 °C hőmérsékleten olvadó A 28 086 A-kaproil-észtert kapunk. Az 5. példában megadott eljárást ismételjük meg, azzal a különbséggel, hogy piridinnel készült reakcióelegyben az A 28 086 A-t valeriánsav-anhidriddel reagáltatjuk, amikor 173-175 °C hőmérsékleten olvadó A 28 086 A-valeril-észtert kapunk. 10. példa Az A 28 086 komplex A komponens nátriumsójának előállítása 500 mg A 28 086 A-t 50 ml acetonban oldunk. 50 ml vizet adunk az oldathoz, majd pH-ját 5 n 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 11
