174258. lajstromszámú szabadalom • Eljárás liposzómák vizes diszperziójának előállítására
9 174258 10 adunk a rendszerhez, amelyet szobahőmérsékleten 1 percig kezelünk ultrahanggal. Az ultrahangot egy Branson B 12 típusú generátorral állítjuk elő (20 kHZ, 150 W), A kezelés után kapott átlátszó oldatot egy centrifugacsőben hozzáadjuk 10 ml 9 ezrelékes nátriumklorid-oldathoz, azután a rendszert 20 percig centrifugáljuk percenként 30 000 fordulattal. A felső fázist dekantáljuk, az alsó fázisból 2 ml-es mintát veszünk. A mintát Sephadex G-50 gélen kromatografáljuk, eluálószerként 0,15 mólos nátriumklorid oldatot és 7,5 pH-jú foszfát puffert használunk. A vizsgálat tanúsága szerint a kiindulási inzulin-mennyiség 55—60%-a a liposzómákba ment át. A kapott liposzóma-oldatot minden további tisztítás nélkül fel lehet használni a gyógyászatban. 8. példa Amiloglukozidáz 0,15 mól/literes vizes nátriumklorid-oldattal készített 10 mg/ml töménységű oldatát az alábbi módon kapszulázzuk be. 74 mg foszfatidil-etanolamint és 0,1 ml fenti vizes amiloglukozidáz-oldatot hozzáadunk 3 ml diizopropiléterhez, és az így kapott heterogén keveréket 2 percig kezeljük ultrahanggal, miközben hőmérsékletét hűtőfürdővel 30 °C alatt tartjuk. Az ultrahang frekvenciája 20 kHz, kimeneti teljesítménye 150W. Az ultrahangos kezelés után átlátszó, homogénnek tűnő, kékes színben játszó folyadékot kapunk. Ezt a folyadékot hozzáadjuk 15 ml 0,15 mól/liter töménységű vizes nátriumklorid oldathoz, és az így kapott heterogén rendszert a 7. példa szerinti módon centrifugáljuk 45 percig. A fázisokat szétválasztjuk. Az alsó fázis tiszta folyadék, amely az amiloglukozidáz vizes oldatát tartalmazó kolloid méretű liposzómák 0,15 mólos vizes nátriumklorid oldattal készült szuszpenziója. A kapott folyadékban csekély, mintegy 5% mennyiségű bekapszulázatlan amiloglukozidáz van. A kapott liposzóma-szuszpenziót felhasználhatjuk minden további tisztítás nélkül, vagy eljárhatunk úgy, hogy felhasználás előtt a be nem kapszulázott amiloglukozidázt például Sepharose D kromatográfiával eltávolítjuk. 9. példa A 7. példa szerinti módon járunk el, azzal az eltéréssel, hogy arabinóz-citrozín 0,15 mólos vizes nátriumklorid-oldattal készített és 10 mmólos vizes foszfátpufferral pH 7,2-re pufferolt oldatának 0,05 ml-ét kapszulázzuk be. Az ultrahangos kezelésnek alávetett szerves fázis kialakításához 47 mg kardiolipint, 2,4 ml díbutilétert és 0,6 ml kloroformot használunk. 10. példa A 7. példa szerinti módon bekapszulázzuk penicülamin 0,15 mólos vizes nátriumklorid-oldattal készített 100 mg/ml töménységű oldatának 0,1 ml-ét. E folyadékot az ultrahangos kezelés előtt 105 mg lecitinnel, 35 mg koleszterinnel és 3 ml butilacetáttal keverjük össze. 11. példa Betamatazon-dinátriumfoszfát 0,15 mólos vizes nátriumklorid-oldattal készített 150 mg/ml töménységű oldatának 0,05 ml-ét kapszulázzuk be a 7. példa szerinti módon. Az ultrahangos kezelésnek alávetett szerves fázist oly módon alakítjuk ki, hogy az előbbi oldatot 85 mg lecitinnel, 45 mg foszfatidil-etanolaminnal és 3 ml 3-heptanonnal keverjük össze. 12. példa Egy poliinozinsav-policitidinsav komplex (Poly (I) Poly (C)) 0,15 mólos vizes nátriumklorid-oldattal készített 1 mg/ml töménységű oldatának 0,1 ml-ét kapszulázzuk be a 7. példa szerinti módon. Az ultrahangos kezelésnek alávetett fázist úgy alakítjuk ki, hogy az előbbi folyadékot 60 mg lecitinnel, 20 mg sztéarilaminnal és 15 mg koleszterinnel, valamint 3 ml 1 :1 arányú diizopropiléter-butilacetát eleggyel keverjük össze. 13. példa 20 ml diizopropiléterhez hozzáadunk 1,5 g lecitint, 0,4 g foszfatidil-szerint és 0,5 g koleszterint. Az így kapott rendszerhez ezután hozzáadjuk 1,8 mg aktinomicin D 3 ml 0,1 mólos foszfátpufferral (pH 7) készített oldatát. A rendszert a 7. példa szerinti módon kezeljük ultrahanggal 5 percig. Ezután a rendszerhez 100 ml foszfátpuffert (0,1 mól, pH 7) adunk, és a kétfázisú rendszert a 7. példában ismertetett módon centrifugáljuk. A kapott termék mintájának kromatográfiás vizsgálata alapján az aktinomicin D 88%-a ment át a liposzómákba. 14. példa 1 g tripszint feloldunk 30 ml foszfát pufferban (0,1 mól, pH 7), és az oldatot hozzáadjuk 30 g föszfatidil-inozitot tartalmazó 100 ml dipropiléterhez. A rendszert az előbbiekhez hasonlóan kezeljük ultrahanggal, azután hozzáadjuk 460 ml 0,5%-os vizes nátriumklorid-oldathoz. A rendszert az előbbiek szerint centrifugáljuk. A vizes fázis analízise alapján a bekapszulázás hozama közel 70%. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás liposzómák vizes diszperzióinak előállítására, azzal jellemezve, hogy egy biológiailag aktív vegyület vizes oldatát vagy diszperzióját egy poláris hidrofil és apoláris hidrofób csoportokat tartalmazó 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
