174189. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nem-vas komponens elválasztására a globintól vértartalmú folyadékokban
5 174189 6 Htjuk. Az így kapott hemoglobin-oldat szárazanyagtartalma (főképpen hemoglobin) 15%, ezenkívül még tartalmaz 33 térfogat% etilalkoholt, a maradék pedig víz, a sötétvörös oldat pH-ja 5,3. Egy 36 ml 94%-os etilalkoholt, 6 ml vizet és 0,55 ml 1 m-os sósavoldatot tartalmazó oldathoz 2.5 g fenti hemoglobin-oldatot csöpögtetünk -12,°C hőmérsékleten, hűtés közben. Az adagolás befejeztével a hőmérséklet —12 °C és a pH 3,0. Ezután az elegyhez 45 ml 94%-os etilalkoholt adunk és a folyadékot 8000 g értéken 10 percen keresztül centrifugáljuk, mintegy 0,1 g fekete hem-vas-agglomerátumot kapunk. A dekantált felülúszó réteghez 0,4 ml 20%-os vizes ammóniumszulfát-oldatot adunk és a pH-t sósav-oldattal 3,0-ra állítjuk be. A kapott globin-csapadékot 8000 g értéken 10 perc alatt centrifugáljuk. A globin-pasztát ezek után -10°C-on és pH 3,1 értéken 85%-os etilalkohollal mossuk, majd centrifugáljuk. 0,45 g globin-pasztát kapunk, 36%-os szárazanyagtartalommal. A felülúszóból újabb 0,4 ml ammóniumszulfát adagolásával további 0,40 g globin-pasztát kapunk, melynek szárazanyagtartalma 42%. A globin-paszták halványszürke színűek, a felülúszó erősen barna, és triklórecetsawal nem ad csapadékot. 2. példa 1 ml 1 m-os sósav-oldatot elkeverünk 20 ml etilalkohollal, és a kapott oldathoz keverés és hűtés közben -15°C-on cseppenként adunk 5 g 1. példa szerinti hemoglobin-oldatot. Az adagolás után a hőmérséklet —15 °C, és a pH-érték 2,9. A keveréket 27000 g értéken 20 percen át centrifugáljuk, így 0,9 g fekete paszta alakú hem-vas-agglomerátumot kapunk, melynek szárazanyagtartalma 8,3%. Az erősen barna felülúszó réteghez keverés közben —15 °C-on 50 ml 94%-os etilalkoholt adunk, és a globin-tartalmú anyagot 10 ml vízzel és 1,2 ml 20%-os vizes ammóniumszulfát-oldat segítségével kicsapjuk. A csapadékot 8000 g értéken 10 percen át centrifugáljuk, majd a nyert globin-tartalmú pasztát 94%-os -15°C-os etilalkohollal feliszapoljuk, és az előbbiek szerint újra centrifugáljuk. Ily módon 1.6 g globin-pasztát kapunk, melynek szárazanyagtartalma 37,6%. Szárazon a paszta világos szürke színű. A csapadék feletti feiülúszó réteg triklórecetsavval csapadékot nem ad. 3. példa 40 ml 94%-os etilalkohol és 1,1 ml 1 m-os sósav-oldat elegyéhez —15 °C-on keverés és hűtés közben 5 g 1. példa szerinti hemoglobin-oldatot csepegtetünk. Az adagolás befejeztekor a hőmérséklet -15 °C és a pH értéke 2,9. A keverékhez 5 írd 20%-os vizes nátriumklorid-oldatot csepegtetünk, majd a folyadékot 27000 g értéken 20 percen keresztül centrifugáljuk. Ily módon 1,4 g fekete hem-vas-agglomerátum pasztát kapunk, melynek szárazanyagtartalma 11%. A felülúszó réteghez 12 ml vizet és 1 ml 20%-os vizes ammóniumszulfát-oldatot adunk, majd a folyadékot 8000 g értéken 10 percen keresztül centrifugáljuk. %, 8 g szürke globin-pasztát kapunk 14,6% szárazanyagtartalommal. 4. példa 5 g 1. példa szerinti hemoglobin-oldatból a hemoglobint —6 °C-on keverés és hűtés közben 10 ml 94%-os etilalkohollal kicsapjuk. A csapadékot 2000 g értéken 10 percen keresztül centrifugáljuk, így 6 g vörös pasztát kapunk. A centrifugacső alján csekély mennyiségű fekete paszta is található. A vörös pasztát 70 ml etilalkohol és 1,1 ml lm-os sósav-oldat elegyéhez adagoljuk -12°C-on keverés és hűtés közben. Az adagolás befejeztekor a hőmérséklet -12 °C és a pH 2,9. A keveréket 27000 g értéken 10 percen át centrifugáljuk és ily módon kis mennyiségű pasztát kapunk. A felülúszó réteghez 2 ml 40%-os vizes ammóniumszulfát-oldatot és 10 ml vizet adunk. A hőmérséklet —8 °C, a pH 3,4. A szürke globin-csapadékot 8000 g értéken 10 percen át centrifugáljuk és így 1,5 g szürke globin-pasztát kapunk 93,3% szárazanyagtartalommal. 5. példa 20 ml 94%-os etüalkoholból és 1,1 ml lm-os sósav-oldatból álló -12°C-os elegyhez keverés és hűtés közben 5 g 1. példa szerinti hemoglobin-oldatot csepegtetünk. Az adagolás után a pH-érték 2,9 és a hőmérséklet -12 °C. A bamásfekete keveréket 27000 g értéken 10 percig centrifugáljuk és így 2,2 g fekete hem-vas-agglomerátum pasztát kapunk és egy barna felülúszó folyadékot, mely a későbbiek során gélszerű állapotot vesz fel. A felülúszó réteghez keverés és hűtés közben cseppenként adunk 70 ml 94%-os etilalkoholt, 0,8 nil 40%-os vizes ammóniumszulfát oldatot és 8 ml vizet. Az adagolás után a hőmérséklet -6 °C. A csapadékot 8000 g értéken centrifugáljuk 10 percen keresztül és ily módon 1,7 g fehér globin-pasztáí kapunk, melynek szárazanyagtartalma 36%. 6. példa . Egy 0,4 ml 1 m-os sósav-oldatot, 7,5 ml vizet, 10 ml 96 térfogat%-os etilalkoholt és 0,2 ml 30%-os vizes káliumklorid-oldatot tartalmazó, —6 cC hőmérsékletű oldatba 3 g 1. példa szerinti hemoglobin-oldatot csepegtetünk —6 °C hőmérsékleten, hűtés és keverés közben. Az adagolás befejeztével a hőmérséklet —6 °C és a pH 3,3. Az elegy etilalkohol-tartalma 50 térfogati A barnásfekete színű elegyet 9000 g értéken 10 percen keresztül centrifugáljuk. 0,035 g szárazanya5 IC 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
