174160. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kristályos inzulinból és oldott dez-fenilalanin-inzulinból álló antidiabetikus-inzulin-kombináció előállítására
7 174160 8 semleges inzulint-hígító-oldatban (összetételét lásd a III. táblázatban) újból szuszpendáljuk (alapszuszpenzió). III. táblázat Az inzulint-hígító-oldat összetétele: 10 liter oldat tartalmaz: 10 g 4-hidroxi-benzoesav-metilésztert = 0,1 %-t 14 g nátriumacetát-trihidrátot = 0,14%-t 75 g nátriumkloridot = 0,75%-t 210 mg dnkkloridot (ZnCl2) =10 meg Zri^/ml nátriumhidroxid-oldatot 6,9 pH-értékig. Az oldatot sterilen szüljük. Az alapszuszpenzió kristályos inzulintartalmának a meghatározása Az alapszuszpenzió kristályos inzulin-tartalmának meghatározásához a kristályos-szuszpenzióból, mágneses keverő segítségével történő intenzív keverés után, négyszer egyenként 10ml-t (teljes pipettányit) kiveszünk és az inzulin-tartalmat a következő módszerek szerint határozzuk meg: 1. Gravimetriásán acetonnal és éténél történő szárítás és mérés után. 2. A kristályok feloldása után spektrofotometriás úton ultraibolya fényben 280 nm-nél. 3. A nitrogén-tartalom meghatározása útján. 40. I.E./ml-t tartalmazó depó-komponens előállítása Az alapszuszpenzióban meghatározott inzulin-tartalom szerint ezt az értéket a steril hígító-oldat további hozzáadásával a kívánt 40I.E./ml inzulin-tartalomra állítjuk be. így maximum 10 liternyit készítünk. B) Oldott komponens, dez-fenilalanin®1-sertés-inzulin-oldat előállítása 6,304 g kristályos dez-fenilalaninB 1 -sertés-inzulint feloldunk 3,5 liter, a IV. táblázatban megadott összetételű oldófolyadékban, IV. táblázat A dez-fenilalaninB 1 -sertés-inzulin oldófolyadéknak összetétele. 5 liter oldat tartalmaz: 5 g 4-hidroxi-benzoesav-metilésztert = 0,1 %-t IV. táblázat folytatása 2,85 ml ecetsavat, amely nátriumacetát-trihidrátból eredményez = 0,14%-t 37,5 g nátriumkloridot = 0,75%-t 42 mg (vízmentes) dnkkloridot = 4,0 meg Zn^/ml-t 5 ml 4 n sósav-oldatot. A dez-fenilalaninB1-inzulin tiszta oldatát ezután membránszűrő segítségével csíramentesítjük és hozzáadunk 400 ml fenti, ugyanazon a sterilező szűrőn átfolyatott oldófolyadékot, és így az oldat térfogatát 3,9 literre állítjuk be. 4 n steril nátriumhidroxid-oldat hozzáadásával (körülbelül 13 ml) a pH-értéket 6,9-re állítjuk be. 34 ml steril semleges inzulint-hígító-oldat további hozzáadásával (összetételét lásd az I. táblázatban) a végső térfogatot 3,947 literre és az inzulin-tartalmat 401.E./ml-re állítjuk be. A kapott dez-fenilalanin® ^sertés-inzulin-oldat aktivitása 25 I.E./mg. C) Alkalmazásra kész készítmény előállítása 2.A) példa szerint előállított kristályos sertés-inzulin-depó-komponenst a 2.B) példa szerint előállított, oldott dez-fenilalaninB 1 -sertés-inzulint tartalmazó komponenssel elegyítjük 80—20 térfogatarányban, a kapott készítmény 321.E./nú kristályos sertés-inzulint és 8 I.E./ml oldott dez-fenilalanin - -sertés-inzulint, tehát összesen 40 I.E./ml inzulint tartalmaz. A szuszpenziót steril körülmények között 10 ml-es üvegekbe töltjük. 3. példa 75 rész 1. vagy 2.A) példák szerint előállított kristályos inzulin-depó-komponenst 25 rész 1. vagy 2.B) példák szerint előállított, azonos fajtájú oldott dez-fenilalaninB1-inzulint tartalmazó komponenssel elegyítünk, a kapott készítmény 301.E./ml kristályos inzulint és 10 I.E./ml oldott dez-fenilaláninB1- -inzulint, tehát összesen 40 I.E./ml inzulint tartalmaz. A szuszpenziót sterilen 10 ml-es üvegekbe töltjük. 4. példa 70 rész 1. vagy 2.A) példák szerint előállított kristályos inzulin-depó-komponenst 30 rész 1. vagy 2.B) példák szerint előállított, azonos fajtájú oldott dez-fenilalaninB1-inzulint tartalmazó komponenssel elegyítünk, a kapott készítmény 28I.E./ml kristályos inzulint és 12I.E./ml oldott dez-fenilalaninB1- -inzulint, tehát összesen 40I.E./ml inzulint tartalmaz. A szuszpenziót steril körülmények között 10 ml-es üvegekbe töltjük. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
