174128. lajstromszámú szabadalom • Eljárás alkálifém- vagy ammónium-inzulin tisztítására gélszűréssel
9 174128 10 Példa 5,53 g mennyiségű, 26,4 E/mg hatóerejű és 7,2 súly% proinzulin tartalmú marha nátrium-inzulint (előállítás: 3 719 655 sz. Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás szerint) desztillált vízben szuszpendálunk, majd a szuszpenzióhoz pH = 9,0-ig híg nátrium-hidroxid oldatot adunk. A kapott oldat térfogata 100 ml. Most 5% vízfelvevőképességű és 20—80 mikron szemcseméretű térhálósított dextrán gélt 9,0 pH-jú vizes nátrium-hidroxid oldatban hozunk egyensúlyba. A duzzasztott gélt 4,0 cm átmérőjű, 43,0 cm magasságú és 540 ml ágytérfogatú oszlopba töltjük. Az inzulin oldatból ezután 40 ml mennyiséget az oszlopra öntünk és az oszlopot 9,0-es pH-jú vizes nátrium-hidroxid oldattal eluáljuk. Az eluálásnál kb. 6,5 ml térfogatú frakciókat gyűjtünk. Az eluálás folyamatát az ultraibolya abszorpció 280 m/r-nál történő mérésével követjük nyomon. Az inzulin összetevőnek megfelelő frakciókat egyesítjük és az egyesített oldat pH-ját 6 n sósavoldattal, 3,0-ra állítjuk be. A kapott oldatot szűrjük, dnkkloridot adunk hozzá és a cink-inzulint ammónium-acetát pufferból pH - = 6,0-'nál különítjük el. A cink-inzulin kitermelés 1,83 g, ami a kiindulási anyag mennyiségére számítva 82,5%-os hozamnak felel meg. A kapott inzulin hatóereje 26,8 E/mg. A termék proinzulin tartalma 0,05 súly% alatt van. Az egység alapján számított hozam 83,8%. Az eredeti inzulin oldat 37,5 ml mennyiségű részét a gélszűrés lépésének kihagyásával, egyébként azonban teljesen a fent leírt módszer szerint járva el, közvetlenül alakítjuk cink-inzulinná. A kitermelés 1,87 g (90,1%-os hozam.) Az így kapott cink-inzulin proinzulin tartalma 5,4súly%. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás alkálifém- vagy ammónium-inzulin tisztítására gélszűréssel, azzal jellemezve, hogy legfeljebb 100 mikron, előnyösen 20—80 mikron szemcse méretű és száraz állapotban legalább 4súly%, előnyösen 4-98súly% vízfelvevőképességű gélt duzzasztunk, a duzzasztott géllel oszlopot töltünk meg, az így kapott töltött oszlopra legalább 80%-os tisztaságú alkálifém- vagy ammónium-inzulin vizes oldatát öntjük - amelyben az inzulin koncentrációja 1- és 8súly/tf% közötti érték, mi mellett az inzulin teljes mennyiségéhez 0,8 és 6,7 g/liter közötti ágytérfogatú töltött oszlop szükséges és az oldat pH-ja 7,5 és 9,5 közötti érték — és az oszlopról az inzulint 5 °C és 30 °C közötti hőmérsékleten valamely fenti pH 3 tartományba eső, kívánt esetben szervetlen sót is tartalmazó, vizes eluálószerrel eluáljuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy olyan gélt alkalmazunk amelynek vízfelvevőképessége 5-20 súly%. 10 3. A 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy gélként térhálósított dextránt alkalmazunk. 4. A 3. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy olyan térhálósított 15 dextrán gélt használunk, melynek a vízfelvevőképessége 5 súly%. 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy 3,5 és 5,0 g/liter ágytérfogatú töltött oszlopot használunk. 20 6. Az 5. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy 4,5 g/liter ágytérfogatú töltött oszlopot használunk. 7. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási 25 módja, azzal jellemezve, hogy olyan eluálószert használunk, mely 0,02 mól koncentrációig szervetlen sót is tartalmaz. 8. A 7. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy 0,01 mól mennyi-30 ségű szervetlen sót tartalmazó eluálószert használunk. 9. A 8. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy szervetlen sóként nátrium-kloridot alkalmazunk. 35 10. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az eluálást szobahőmérsékleten végezzük. 11. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az eluálást 40 5°C hőmérsékleten végezzük. 12. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, marha nátrium-inzulin tisztítására, azzal jellemezve, hogy 5 súly% vizfelvevőképességű és 20-80 mikron szemcseméretű térhálósított dext-43 rán gélt duzzasztunk, a duzzasztott gélt 4,0 cm átmérőjű, 43,0 cm magasságú, 540 ml ágytérfogatú oszlopba töltjük, a töltött oszlopra 5,5 súly/tf% inzulin koncentrációjú és 9-es pH-jú vizes marha nátrium-inzulin oldatot öntünk, majd az oszlopról 50 az inzulint szobahőmérsékleten, 9-es pH-jú vizes nátrium-hidroxid oldattal eluáljuk. A kiadásért féld: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 804456 - Zrínyi Nyomda, Budapest 5
