174117. lajstromszámú szabadalom • Eljárás chinosporin C antibiotikum izolálására
3 174117 4 adunk, a csapadékos oldatot +4 °C-on egy éjjelen át állni hagyjuk, majd a csapadékot dekantálással elkülönítjük. A kapott csapadékot vákuumban 25 °C-on 3 órán át szárítjuk. Az ily módon nyert termékek súlyát és biológiai aktivitását mérjük. A kapott eredményeket az I. táblázat tartalmazza. I. táblázat A vizsgált gyanta Kapacitás mekv./g (A) mekv./ml (B) Chinosporin C megkötés ml nedves gyanta A tennék tisztasági foka a munka-standardhoz képest Duolite CS 100 1,8 (A) 7110 65% (Chemical Process. CO, USA) 0,8 (B) Permutit H 5,0 (A) 6310 32% (Permutit Co, USA) 1,8 (B) Zeo-Carb 216 2,5 (A) 4570 19% (Permutit Co, USA) a 165 669 lajstromszám 1,1 (B) magyar szabadalmi leírás szerinti (Chinoin, Budapest) 3,66 (A) 0,61 (B) 9870 100% Asmit 173 (Industrieele Vij. Activit N.V. Hollandia) színtelenítő szorbens 3750 10%. A biológiai aktivitásokat egy általunk előállított nagy tisztaságú Chinosporin C munka-standardhoz mértük Eschericia colival agardiffúziós módszerrel (Kavanglu F. Analytical Microbiology, 1963. A code mic Press). A standard kiválasztása véghígításos módszerrel történt, azaz, azt a preparátumot tekintettük standardnak, amely a legnagyobb hígításban gátolt az Eschericia coli lemezen. Jelen esetünkben ez egy olyan készítmény, amelynek 0,1 7/ml koncentrációjú oldata még gátolt. Ezen készítmény a 169 838 lajstromszámú magyar szabadalmi leírásban ismertetett készítménynél huszonötször tisztább. A továbbiakban ezen készítményhez viszonyítva adjuk meg a fermentlé és a kinyert tennék antibiotikum-tartalmát 7/ml-ben, tekintettel arra, hogy eddig nem sikerült a Chinosporin C-t kristályos formában előállítani. Az 1. táblázat adatai között szerepel egy olyan gyantára vonatkozó vizsgálati adatpár is, amely gyanta csupán adszorpciós sajátságokkal rendelkezik (Asmit 173), hogy a találmány szerinti eljárásban a gyanta ioncserélő jellegének hatékony szerepét demonstráljuk. Az I táblázat adataiból kitűnik, hogy a csupán adszorpciós tulajdonságú szorbens alkalmazásával nem lehet megfelelő tisztaságú terméket előállítani. A tisztasági fok 10%-ra romlott. A vizsgálataink szerint a legnagyobb szorpdókészséget a 165 669 lajstromszámú magyar szabadalmi leírás szerint készített fenol-formaldehid polikondenzádós gyanta mutatta (Chinoin, Budapest) azzal a nagy előnnyel, hogy ez a gyanta eredményezte a legnagyobb tisztasági fokú terméket is. Ez 35 a nevezett gyanta szelektíven adszorbeáló jellegét támasztja alá. A fehérjék deszorbeálódását a savas közeg-kémhatás zárta ki. A végtermék tisztaságának további növekedését érhetjük el a következő lépések közbeiktatásával: 40 1. az eluátum kromatografálása. Fontos körülmény, hogy a felhasznált gyanta kapadtása az ismételt kromatografálás folyamán a korábbi 9,8 mg/ml-ről 140—200 mg/ml Chinosporin C meg-45 kötésére emelkedett. Ennek az a jelentősége, hogy a nagy térfogatú fermentlevekből első kromatografálással nyert eluátumot nagymértékben be lehet általa töményíteni. Ezt a 3. példában mutatjuk be. 2. a szorpdó után 0,1 mólos, 8 pH-jú foszfát 50 pufferrel való mosás. 3. az eluátumhoz alkohol hozzáadása. Ezzel, hogy az ekkor kiváló csapadékot kiszűrjük, a munkastandardhoz képest 4,7-szer aktívabb anyag állítható elő. 55 A találmány szerinti eljárással a 169 838 lajstromszámú magyar szabadalmi leírásban ismertetettnél mintegy 140-szer tisztább antibiotikum nyerhető ipari szempontból elfogadható, mintegy 30%- 60 -os kitermelés mellett. A nagy tisztaságú, por alakú termék előállítását az 1. példában mutatjuk be. A nagyüzemi eljárás leegyszerűsítése céljából megvizsgáltuk azt a szorpdós megoldást is, amelynél a gyantát belekeverik a fermentlébe. Ebben az 65 esetben a gyanta kapadtása 9,87 mg/ml-ről 2
