174117. lajstromszámú szabadalom • Eljárás chinosporin C antibiotikum izolálására
MAGYAR NÉPKÖZT A RSASAG SZABADALMI LEÍRÁS SZOLGÁLATI TALÁLMÁNY 174117 0 Bejelentés napja: 1977. III. 03. (Cl—1723) Nemzetközi osztályozás: C 12 D 9/02 ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL Közzététel napja: 1979. II. 28. Megjelent. 1980. IV. 30. Íj * Feltalálók: Szabadalmas: Dr. Simon Ágoston orvos mikrobiológus, Chinoin Gyógyszer és Vegyészeti Bátkai László vegyész, Budapest. Termékek Gyára Rt. Budapest Eljárás Chinosporin C antibiotikum izolálására 1 A találmány tárgya eljárás Chinosporin C antibiotikum izolálására fermentléből oly módon, hogy a fermentléből kationcserélő típusú szorbenssel kivonjuk az antibiotikumot, amelyet azután a megkötésnél alkalmazott pH értéknél alacsonyabb pH 5 értéken kis térfogatú eluenssel eluálunk, az eluátumot nagyobb tisztaságú fok szükségessége esetén semlegesítés után a fenti szorbensen kromatografáljuk, végül az eluátumból az antibiotikumot szerves oldószerek) felhasználásával kicsapjuk. 10 A 169 838 lajstromszámú magyar szabadalmi leírásból eljárás ismerhető meg a Chinosporin C antibiotikum izolálására. Eszerint az izolálás aktív szén felhasználásával történik és a kinyert termék 15 alacsony tisztasági fokú, a kitermelés pedig mindössze 9%. A feldolgozott fermentlé Bacillus coagulans felhasználásával készült. Jelen találmány célkitűzése az, hogy eljárást szolgáltasson a Bacillus coagulans fajhoz tartozó 20 baktérium által termelt, feltehetően kis molekulasúlyú Chinosporin C antibiotikum jobb hatásfokkal és nagyobb tisztaságban való kinyerésére fermentlevekből. Kísérleteink során megvizsgáltuk a különböző 25 ioncserélő gyanták szorpciókészségét Chinosporin C antibiotikumra. Sorozatvizsgálataink azt mutatták, bogy a fenol-formaldehid polikondenzációs kationcserélő gyantákkal szorbeálható legjobban az antibiotikum. Az erősen kationcserélő típusoknál, mint 30 2 például a Varion KC (Nitrokémia, Fűzfő), az SP SephadexC 25 (Sephadex Co. Svédország), nagy szorpciókészség mutatkozik, azonban a megkötődés és az eluálás olyan igénybevételt jelent az antibiotikum számára, hogy az elérhető kitermelés - az antibiotikum aktivitása alapján meghatározva — ezeken a gyantákon végezve a szorpciót csak igen alacsony lehet. Sokkal kedvezőbb eredményeket kapunk, ha a vizsgálatokat gyengén kationcserélő gyantákon végezzük. A gyanták vizsgálata a következő módon történik: a vizsgálandó gyantát 1 n sósav-oldat és 1 n nátrium-hidroxid-oldat felhasználásával Na+-formára hozzuk. Ezután desztillált vízzel semlegesre mossuk, 0,1 mólos, 5,2 pH-jú foszfát-puffenel ekvilibráljuk, és 1 cm belső átmérőjű kromatografáló csőben 10 ml-es oszlopot készítünk belőle. Az így előkészített oszlopon +4 és +25 °C közötti hőmérsékleten 500 ml 5,2 pH-ra beállított natív fermentlevet csorgatunk át mintegy 1,5-2 ml/perc sebességgel. Az eluálást 30 ml 1 n sósav-oldattal végezzük. Az eluátum első 10 ml-ében biológiai aktivitást nem találunk. A további 20 ml-t 5-5 ml-enként 6 pH-ig semlegesítjük. A pH beállításához előnyösen olyan bázist használunk, amelynek sója etanolban és acetonban nem oldódik, így pl. nátrium-hidroxidot vagy valamely alifás amint, pl. trietanolamint. Az ily módon kapott 20 ml főfrakcióhoz 40 ml abszolút etanolt és 180 ml acetont 174117
