174114. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új aminosav-származékok előállítására
19 174114 20 30. példa 2,58 g (10 niM) L-N<2,6-dioxo-3-piperidil)-ftálimidet [J. Pharm. Sei. 57: 757, (1968)] nátrium-etilát abszolút etanollal készült oldatában oldunk. Az oldatot vákuumban bepároljuk, a maradékot 50 ml dimetilformamidban oldjuk és keverés közben 2,25 g (11 mM) brómetánszulfonsavas nátriumsót adunk hozzá. Az elegyet 2 órán át melegítjük, majd vákuumban bepároljuk. A maradékot vízben oldjuk, Dowex-50 oszlopra visszük és vízzel eluáljuk. Az eluátumot vákuumban bepároljuk, a visszamaradó anyagot 100 ml 0,5 normál sósavban 3 órán át forraljuk. Az oldat bepárlása után az anyaghoz 30 ml etanolt, 0,7 ml 72%-os hidrazin-hidrátot adunk és az elegyet 1 órán át forraljuk. Ezután az elegyet vákuumban bepároljuk, a maradékhoz 25 ml 2 normál sósavat adunk és az elegyet 50°C-on melegítjük 10 percig, majd 30 percen át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A kivált szilárd anyagot szűréssel eltávolitjuk és a szűrletet vákuumban bepároljuk, a maradékot exszikkátorban szilárd káhum-hidroxid felett szárítjuk. Az anyagot víz-ecetsav-hangyasav 90 : 8 : 2 térfogatarányú elegyében oldjuk és egy 2 x 100 cm-es Dowex 1-es oszlopra visszük, melyet előzetesen fenti oldószer-eleggyel ekvilibráltunk. Az eluálást ugyanezen oldószerrel kezdjük el és 400 ml eluátumot szedünk. Ez a frakció a-L-glutamil-taurint tartalmaz. Ezután az oszlopot 0,5 normál sósavval eluáljuk és újabb 40Q ml eluátumot gyűjtünk, amelyet vákuumban, 35 °C-on szárazra párolunk. A maradékot exszikkátorban szilárd kálium-hidroxid felett szárítjuk és 80%-os etanolból átkristályosítjuk. A termék 1,07 g y-L-glutamil-taurin, melyek fizikai állandói a 25. példában megadottal azonosak. 31. példa 4,43 g (10 mM) karbobenziloxi-L-piroglutaminsav-diciklohexilamin-sót [Liebig’s Ann. 640: 145, (1961)] l,25g (lOmM) taurint és 0,84g (lOmM) nátrium-hidrogén-karbonátot feloldunk 50 ml vízben. Az oldatot 4 órán át melegítjük (vagy 24 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk), majd vákuumban bepároljuk. A maradékot vízben oldjuk, Dowex-50 oszlopra visszük és vízzel eluáljuk. Az eluátumot bepároljuk. Az így kapott anyagot az 5. példa szerint katalitikus hidrogénezésnek vetjük alá. Etanol-víz elegyből történő átkristályosítás után 2,03 g 7-L-glutamil-taurint kapunk, amelynek fizikai állandói a 25. példában megadottal azonosak. 32. példa 6,05 g (50 mM) 2-amino-2-(hidroximetil)-propán-1,3-diol-t (TRIS-t), 4,38 g (74 mM) nátrium■kloridot, 2,50 g (20 mM) taurint és 6,14 g (20 mM) redukált glutationt feloldunk 900 ml vízben. Az oldat pH-ját koncentrált sósavval 8,0-ra állítjuk, majd az oldat térfogatát vízzel 1 literre egészítjük ki. Az oldathoz 100 mg y-glutamil-transzpeptidázt adunk [disznóveséből izolálva Orlowski, M., Meister, A., J. Biol. Chem. 240, 338. (1965) szerint]. Az oldatot ezután 1 órán át 37 °C-on állni hagyjuk, majd 100 ml 50 térfogatszázalékos triklórecetsav-oldatot adunk hozzá. A kivált csapadékot centrifugálással eltávolítjuk, majd folyamatos extraktorban a triklórecetsavat éterrel 8 órán át extraháljuk. Az oldatot ezután 30 °G-on vákuumban mintegy 100 ml-re bepároljuk és egy 2,2 x 50 cm-es, formiát-ciklusban levő Dowex-1 ioncserélővel töltött oszlopra visszük, majd az oszlopon 200 ml 0,2 mólos hangyasav-oldatot bocsátunk át. Az ioncserélőn abszorbeálódott anyagot 1 n sósav-oldattal eluáljuk. A sósav megjelenését követően 50 ml oldatot szedünk. Ezt az eluátumot először mintegy 15Hgmm-es nyomáson, 30 °C-on, majd 0,1 Hgmm-es nyomáson szobahőmérsékleten szárazra pároljuk. A maradékot 80%-os etanolból átkristályosítjuk. A termék 300 mg 7-L-glutamil-taurin, melyek fizikai állandói a 25. példában megadottal azonosak. 33. példa 3,63 g nyers N-karbobenziloxi-5-(l-benzil)-L-glutamil-taurint 25 ml 96%-os etanolban oldunk, majd hozzáadunk 10 ml ciklohexént és 0,36 g csontszenes palládium-katalizátort (szárazanyag-tartalom 10%, szárazanyagra számított palládium-tartalom 10%). Ezután keverős, visszafolyató hűtővel ellátott lombikban a reakciókeveréket felforraljuk és 30 percen keresztül forrásban tartjuk. A forrást kezdetben gázeltávozás is kíséri. A reakció közben fehér kristálykiválás figyelhető meg. Ezután a reakcióelegyet hagyjuk visszahűlni és egy éjjelen át állni. Másnap a szenes katalizátort és a kivált yL-glutamil-taurint nuccs-szűrővel kiszűrjük, az anyag keveréket a szűrőn abszolút etanollal fedjük, majd a szűrő-pogácsát a 7-L-glutamil-taurin kinyerése céljából 5 x 5 ml desztillált vízzel iszapolva átmossuk. A vizes oldatot Rotadest készüléken vákuumban szárazra pároljuk. 1,13 g fehér, kristályos maradékot nyerünk. A maradékot abszolút etanolban felvesszük, nuccs-szűrőn szűrjük és a szüredéket abszolút etanollal fedjük. 0,95 g 7-L-glutamil-taurint kapunk. Olvadáspont: 221—223 °C. A termék autentikus 7-L-glutamil-taurin mintával összekeverve nem ad olvadáspont-depressziót. Elektroforetikus azonosság-vizsgálattal is 7-L-glutamin-taurinnak bizonyul. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás az új I általános képletű vegyületek - ahol R hidrogénatomot, vagy egy 1—4 szénatomos alkanoil-, aroil- vagy egy aril<l-4 szénatomos)alkoxi-karbonil-csoportot, R1 hidrogénatomot, vagy egy 1—4 szénatomos alkil- vagy egy aril-(1—4 szénatomos)alkil-csoportot, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 10
