174077. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új dekapeptidamid származékok előállítására
7 174077 8 az FSH (folliculust serkentő hormon) kiválasztásának serkentésére. így az 1 általános képletű vegyületek felhasználhatók nőknél, valamint bizonyos állatfajtáknál (például patkányoknál, juhoknál, sertéseknél. teheneknél, kancáknál, tyúkoknál vagy fürjeknél) az ovuláció gyorsítására. Az 1 általános képletű vegyületek felhasználhatók olyan más gyógyászati célokra is. ahol ezideig hagyományos LH—RH. LH és FSH készítményeket használtak. Tekintettel arra. hogy az I általános képletű vegyületek LH—RH hatása a természetben előforduló LH—RH hatásánál 10—25-ször nagyobb, alkalmazásuk esetében a dózis megállapításánál ezt a tényt figyelembe szükséges venni olyan más tényezők, mint például a kezelendő személy vagy a betegség jellege mellett. Így például célszerű dózisként említhetjük meg a napi mintegy 5 nanogramm- 10/ag/testsúlykg dózist. Az I általános képletű vegyületeket elsősorban nem-orális úton alkalmazzuk (így például injekció útján vagy reKtális vagy vaginális úton), bár bizonyos esetekben a szervezetbe juttathatók orálisan is. Az 1 általános képletű vegyületek ismert módon szokásos hordozó- és/vagy segédanyagokkal összekeverve gyógyszerkészítményekké alakíthatók. Ezek közé az alkalmazható gyógyszerkészítmények közé tartoznak az injekciók, kúpok, pesszáriumok és porok. Az injekciós készítmények úgy állíthatók elő, hogy valamely I általános képletű vegyületből mintegy 10-500 7-ot Imi fiziológiás konyhasóoldatban feloldunk. Az I általános képletű vegyületek mannittal olyan liofilizált. ampullákba töltött készítményekké is feldolgozhatok, amelyeket felhasználás előtt konvertálunk injektálható oldatokká vagy szuszpenziókká. A kiindulási anyagként használt peptidek- mint említettük - a peptidszintézisre ismert módszerekkel vagy más önmagában ismert módszerekkel állíthatók elő. A találmányt közelebbről az alábbi kiviteli példákkal kívánjuk megvilágítani. A vékonyrétegkromatográfiás Rf-értékek megadásánál a (kromatografálást mindegyik esetben szilikagélen végezzük) a futtatószerként alkalmazott oldószerrendszerek az alábbiak: Rf1 : kloroform, metanol és ecetsav 9:1: 0,5 arányú elegye. Rf2 : etil-acetát. piridin. ecetsav és víz 30 : 10 : 3 : 5 arányú elegye. Rf'1: n-butanol. etil-acetát. ecetsav és víz 1 : 1 : 1 : 1 arányú elegye. 1. példa (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-(D)-Nva-Leu-Arg-Pro-Gly-NH: előállítása a) Z-(D)-Nva-Leu-Arg(N02 )-Pro-Gly-NH2 előállítása 0 °C-on keverés közben 380 mg Z-(D)-Nva-OH. 690 mg H-Leu-Arg(N02 )-Pro-Gly-NH2 és 300 ing HONB 5 ml dimetil-formamiddal készült oldatához 340 mg DCC-t adunk, majd a reakcióelegyet ugyanezen a hőmérsékleten 2 órán át. ezután pedig szobahőmérsékleten 10 órán át keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet szűrjük a kivált diciklohexil-karbamid elkülönítésére, majd a szűrletet szárazra pároljuk. A kapott maradékot 100 ml kloroformban feloldjuk, majd a kapott oldatot 4%-os vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal és vízzel mossuk, ezután pedig vízmentes magnézium-szulfát felett szárítjuk és végül szárazra pároljuk. A maradékot 25 ml etil-acetát és 25 ml dietiléter elegyével eldörzsöljük. amikor is fehér port kapunk, amelyet kiszűrünk és etanol-dietiléter-elegyből újra kicsapunk. így 1.12 g mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapjuk, amelynek fajlagos forgatóképessége [aß3 =—50.5° (c = 1.1, metanol) és Rf'-értéke 0.32. Elemzési eredmények a C12H5 209N1(i képlet alapján: számított: C = 53.32%. H =7.27%. N = 19.43%. talált: C = 53.49%. H = 7.56%. N = 19.19%. b) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-(D)-Nva-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 előállítása Az a) lépésben kapott polipeptidből 1.0 g-ot feloldunk 10 ml 25%-os ecetsavas hidrogén-bromid-oldatban, majd a kapott oldatot 50 percen át keverjük. A reakcióelegyet ezután 200 ml vízmentes dietiléterrel hígítjuk, amikor is csapadékot kapunk. amelyet kiszűrünk és vízmentes dietiléterrel alaposan átmosunk. Az így elkülönített port ezután csökkentett nyomáson nátrium-hidroxid felett szárítjuk. Ezt követően ezt a port feloldjuk 10 ml dimetil-formamidban 1,0 g (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Phe-OH-val és 440 mg HONB-vel együtt. Az így kapott oldatot 0"C-ra lehűtjük, majd keverés közben az oldathoz 400 mg DCC-t adunk. A reakcióelegyet ezután 6 órán át 0 °C-on. majd 16 órán át szobahőmérsékleten keverjük, ezt követően pedig szűrjük a kivált diciklohexil-karbamid elkülönítésére. A szűrlethez 100 ml dietilétert adunk, amikor is csapadék válik ki. amelyet kiszűrünk. A csapadékot ezután K/í-os vizes etanolban feloldjuk, majd a kapott oldatot 3.5 cm-szer 25 cm méretű. 150—250 mesh méretű Amberlite XAD—2 márkanevű polisztirolgyantából (gyártó cége a Rohm and Haas amerikai egyesült államokbeli cég) készült oszlopra felvisszük, ezután pedig az oszlopot gradiens-eluálásnak vetjük alá 10%-os vizes etanollal és 100%-os etanollal (500:550 ml). A 380 ml és 520 ml közötti frakciókat összeöntjük, majd szárazra pároljuk. A maradékot feloldjuk 5 ml forró metanolban, majd az oldathoz etil-acetátot adunk olyan menynyiségben. hogy csapadék képződjék. így 1.41 g mennyiségben védett dekapeptidamidot kapunk, amelynek fajlagos forgatóképessége [aß4 = -35.4° (c = 0,12, metanol), Rf2-értéke 0,20 és Rf*-értéke 0,56. A védett dekapeptidamidból 500 mg-ot feloldunk 5 ml vízmentes hidrogén-fluoridban 0.5 ml anizolla! együtt -70 °C-on. majd a kapott oldat -5 °C-on 30 percen át végzett keverése után a hidrogén-fluoridot elpárologtatjuk. A kapott mara5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
