173891. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antimicotikus hatású mikoheptin antibiotikum előállítására
5 173891 6 jelenlétében növekszik, szacharóz és ramnóz jelenlétében nem növekszik, gátolja a Gram-pozitív baktériumok, élesztők, élésztő- és t'onalasgombák növekedését, a törzs aktivitása 950-1050 ug/ml. A találmány szerinti eljárás során a Streptoverticillium mycoheptinicum 440 törzs tenyésztéséhez célszerűen az alábbi összetételű táptalajt alkalmazzuk: szójababliszt glükóz kukoricaliszt ammóniumszulfát ámbráscet-zsír kalciumkarbonát kukoricalekvár pH-érték 1.5 súly% 5.0 súly% 2.0 súly% 0,4 súly% 1.0 súly% 0,25 súly% 0,25 súly% (szárazanyag súly) 8.5 súly%. A találmány szerinti eljáráshoz alkalmazott Streptoverticillium mycoheptinicum 440 törzset az alábbiak szerint állítjuk elő: Streptoverticillium mycoheptinicum 44 B/l törzset 1200 Mg/ml mikoheptin-nátriumsót tartalmazó agar-agar táptalajon tenyésztünk, a kapott variánst elkülönítjük és beoltunk vele egy 2400 mg/ml mikoheptin-nátriumsót tartalmazó agar-agar táptalajt. Az ilyen módon tenyésztett variáns a Streptoverticillium mycoheptinicum 440 törzs, amelynek aktivitása 2—3 szorosa a Streptoverticillium mycoheptinicum 44 B/l törzsének. A találmány szerinti eljárás foganatosításához a Czapek-féle keményítőt tartalmazó agar-agar táptalajon tenyésztett Streptoverticillium mycoheptinicum 440 törzsből először inokulumot készítünk a kéthetes tenyészet spóraszuszpenziójának az alábbi táptalajra történő felvitelével és tenyésztésével: glükóz 2,0 súly% szójababliszt 2,0 súly% kalciumkarbonát 0,1 súly% pH-érték a sterilizálás előtt 7,4—7,5 súly% Az oltóanyagot fermentorba visszük, 1 térfogat táptalajra számítva 10 térfogat mennyiségben. Előnyösen az alábbi összetételű táptalajt alkalmazzuk: szójababliszt glükóz kukoricaliszt ammóniumszulfát 1,5 súly% 5.0 súly% 2.0 súly% 0,4 súly% ámbráscet-zsír 1,0 súly's kalciumkarbonát 0,28súly% kukoricalekvár 0,25 súly% (szárazanyag súlya) pH-érték a sterilizálás előtt 8,5. 10 A táptalajt 122-124 °C hőmérsékleten 30 percig sterilizáljuk. A fermentációt 27—29 °C-on 100—130 órán át levegőztetés mellett (0,5—1,0 térfogat) levegő (1 térfogat táptalaj) és erőteljes keverés közben végez- 15 zük. A fermentlé aktivitása a fermentáció végén 930—1050 Mg/m. A fermentáció befejeztével a fermentlevet leszűrjük és a micéliumot leválasztjuk, majd a micéliumból az antibiotikumot szerves oldószerrel — például izopropanollal — extraháljuk. 20 Az extrakciót megismételhetjük. A kapott extraktumokat egyesítjük és legfeljebb 60 °C-on vákuumban legfeljebb 10—20 torr nyomáson bepároljuk. Az így nyert koncentrátumot lehűtjük, vizet adunk hozzá, majd a keletkező csapadékot leválasztjuk és 25 szerves oldószerrel mossuk, és ezt követően vákuumban szárítjuk. A szárított antibiotikumot tisztítjuk. A mikoheptin hozam az aktivitástól függően a micéiium mikoheptin-tartalmára vonatkoztatva 20-25%. 30 A találmány szerinti eljárás előnye, hogy az új Streptoverticillium mycoheptinicum 440 törzs a nagyobb aktivitása folytán lényegesen gazdaságosabb, mint a mikoheptint termelő ismert törzseket alkalmazó eljárások. 35 A találmányt az alábbi kiviteli példa kapcsán szemléltetjük. Példa u-40 Czapek-féle, keményítővel készült ferde agar-agar táptalajon (1 g/liter dikáliumhidrogénfoszfát, 3 g/liter nátriumnitrát, 0,5 g/liter káliumklorid, 0,5 g/liter magnéziumszulfát, 0,015 g/liter vas(II)-szulfát, 20 g/licer keményítő, 20 g/liter agar-agar, vízzel 1 literre 4.5 hígítva. A 7,2-7,3 pH-értékü táptalajt 30 percig sterilizáljuk 1,6 atm nyomáson. A sterilizálás után a táptalaj pH-értéke 6,8-7,0), tenyésztett Streptoverticillium mycoheptinicum 440 törzs kéthetes tenyészetének spóra-szuszpenzióját 750 ml-es lom- 50 bikba töltjük, amelybe előzőleg 100 ml alábbi összetételű táptalajt készítettünk be. glükóz 2,0 súly% 55 szójababliszt 2,0 súly% kalciumkarbonát 0,1 súly% pH-érték a sterilizálás előtt 7,4--7,5. 60 A táptalajt 115-116 °C-on 35 percig sterilizáljuk. Az inokulumot 80 liter űrtartalmú fermentorba visszük, 1 térfogat táptalajra számítva 10 térfogat% mennyiségben. Az alábbi összetételű táptalajt 65 használjuk: 3
