173783. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nonapeptidaminok előállítására
9 173783 10 1. példa (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása a) Z-D-Leu-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása 50 ml diklórmetánban feloldunk 1,58 g Z-D-Leu-OH-t (olaj) és 1,2 g HONB-t, majd hozzáadunk 2,8 g H-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH3-t. Az elegyet 0 °C-ra hűtjük, ezután hozzáadunk 1,4 g DCC-t, és az elegyet 8 órán át keverjük szobahőmérsékleten. A melléktermékként képződött diciklohexilkarbamidot szűréssel eltávolítjuk, és a szürletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot 150 ml etilacetátban feloldjuk, 4%-os vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal kétszer és vízzel szintén kétszer mossuk, vízmentes nátriumszulfát felett szárítjuk, végül csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot etilacetát-petróleum-benzin-elegyből bepárlással újra kiválasztjuk. A fenti módon a cím szerinti vegyület 3,6 g-ját kapjuk. Olvadáspont: 134 °C (bomlás). [“Id5 = -47,3° (c = 0,54, metanolban), Rf 1 = 0,57. Elemzési eredmények C33Hs308N9 összegképlet alapján: számított: C =56,31%, N = 17,91%, H = 7,59%, talált: C =56,08%, N = 17,69%. H = 7,82%, b) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása 30 ml 25%-os, jégecettel készített hidrogénbromid-oldatban feloldunk 3,6 g Z-D-Leu-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2 -CH3 -t és az oldatot szobahőmérsékleten 50 percen át keverjük. Az oldathoz hozzáadunk 300 ml étert, és a keletkező csapadékot szűréssel kinyerjük. Megszárítás után a csapadékot feloldjuk 50 ml vízben és 2,5 cm átmérőjű és 20 cm hosszú Amberlite CG—410 (szabad bázis) oszlopon futtatjuk. Az oszlopot 30%-os vizes metanollal jól kimossuk. Az elfolyó oldatot és a mosófolyadékokat összegyűjtjük, és csökkentett nyomáson a metanol eltávolítása céljából betöményítjük, majd liofílizáljuk. így 3,1 g H-D-Leu-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH2-CH3-t kapunk szabad bázis alakjában. Rf2= 0,24, Rf3= 0,68. 4 ml dimetilformamidban feloldjuk a fenti termék 228 mg-ját és 290 mg (Pyr)Glu-His-T rp-Ser-T yr-OH-t, maid hozzáadunk 144 mg HONB-t. Az elegyet -10 C-ra hűtjük, és hozzáadunk 90 mg DCC-t. Az elegyet 2 órán át —10 °C-on, 4 órán át 0°C-on és 4 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A reakcióelegyet a diciklohexilkarbamid eltávolítása céljából szűrjük. A szűrlethez etilacetátot adunk, és a keletkező csapadékot szűréssel kinyerjük. A csapadékot szárítjuk, és 20%-os vizes etanolban felöljük. Az oldatot 3 cm átmérőjű és 20 cm hosszú, 200 mesh szemcseméretű Amberlite XAD-2 oszlopon futtatjuk, és gradiens eluálást végzünk 300-300 ml 20%-os etanollal és abszolút etanollal. A kívánt termék a 260-360 ml frakciókban 5 jelenik meg. Ezeket a frakciókat csökkentett nyomáson betöményítjük és liofílizáljuk. így 346 mg cím szerinti terméket kapunk. [a]nS=—38,28 (c = 0,l, 0,5%-os metanolban), Rf - 0,235, Rf3= 0,765. 10 c) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D- Leu-Leu-Arg-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása 20 ml 60%-os vizes hangyasavban feloldunk 15 300 mg, b) pontban kapott N02-vegyületet, majd hozzáadunk 600 mg ónklorid-monohidrátot (SnCl2 • H2 O). Az elegyet 2 órán át melegítjük 80—85 C-on, majd csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot 50 ml melegvízzel (80 °C) 20 extraháljuk. Az extraktumot szűrjük és a szűrletet 3 cm átmérőjű és 20 cm hosszú, 200 mesh szemcseméretű Amberlite XAD-2 oszlopon futtatjuk. Vízzel való mosás után gradiens eluálást végzünk 400—400 ml vízzel és abszolút etanollal. A kívánt 25 termék a 150 ml—260 ml frakciókban jelenik meg. Ezeket a frakciókat összegyűjtjük, és az etanol eltávolítása céljából csökkentett nyomáson betöményítjük. A koncentrátumot 2 cm átmérőjű és 33 cm hosszú karboximetilcellulóz oszlopon futtat- 30 juk, és gradiens eluálást végzünk 0,005-0,2 mól ammóniumacetáttal (pH = 6,8). A cím szerinti pepiid a 330 ml—520 ml frakciókban jelenik meg. Ezeket a frakciókat összegyűjtjük és liofílizáljuk, így 282 mg fehérszínű pelyhes port kapunk. 35 [a]J,4= -32,66° (c = 0,545,5%-os vizes ecetsavban), Rf -0,10, Rf3= 0,75. Aminosav elemzés (hidrolízis 6n sósavval tioglikolsav jelenlétében): His, 1,00, Arg, 0,96, Trp, 0,96, Ser, 1,00, Glu, 1,00, Pro, 1,04, Leu, 2,00, Tyr, 1,00. 40 2. példa (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-a-Aibu-Leu-Arg-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása 45 a) Z-a-Aibu-Leu-Arg(N02 >Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása 7 ml dimetilformamidban feloldunk 0,6 g 50 Z-a-Aibu-OH-t és 0,9 g H-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2 -CH3 -t. Az oldatot 0 °C-ra hűtjük, és hozzáadunk 0,71 g l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)-karbodiimidet, amely vízoldható karbodiimid, majd 12 órán át keverjük. Az oldószert ledesztilláljuk, és 55 a maradékot 100 ml kloroformban feloldjuk. Az oldatot 4%-os vizes nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és n sósavval mossuk, vízzel kirázzuk és vízmentes magnéziumszulfát felett szárítjuk. Az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, és a 50 maradékot éterrel kezeljük, hogy por alakú terméket kapjunk, amelyet szűréssel kinyerünk. A port etilacetát-éter elegyből bepárlással kicsapjuk, így 473 mg cím szerinti terméket kapunk. Olvadáspont: 104-107 °C. [a]f>4=-45,8° (c = 0,55, >5 dimetilformamidban), Rf1 = 0,50. 5
