173751. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új rifamicin-származékok előállítására
23 173751 24 A rifamicin P, amely a leghatásosabb természetes rifamicin amelyet izoláltak, szintén alacsony toxicitással rendelkezik, mivel LDso értéke egereknél nagyobb, mint 500 mg/kg i.p. beadás esetén. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás a II képletű rifamicin P, III képletű rifamicin Q, I képletű rifamicin R és rifamicin U új rifamicin-vegyületek előállítására, azzal jellemezve, hogy aerob körülmények között valamely asszimilálható szénforrás, asszimilálható nitrogénforrás és ásványi sók jelenlétében Nocardia mediterranea ATCC 31064 (D-2), Nocardia mediterranea ATCC 31065 (MM 18-6) vagy Nocardia mediterranea 15 ATCC 31066 (M-36) törzset tenyésztünk, a képződött új rifamicinek keverékét kinyerjük a fermentációs közegből és ezek mindegyikét egyedi termékként elkülönitjük. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási 20 módja, azzal jellemezve, hogy a fermentációt 25 °C és 37 °C közötti hőmérsékleten 180-200 órán át 6,4-8,5 pH-tartományban végezzük. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az új rifamicinek 25 keverékét a fermentációs közegnek valamely vízzel nem elegyedő oldószerrel 5-nél kisebb pH-n történő extrahálásával nyerjük ki. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az új rifamicineket 30 egyedi komponensekként oszlopkromatográfiás úton különítjük el. 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja I képletű rifamicin R előállítására, azzal jellemezve, hogy a fermentlé pH-értékként híg 35 sósavval 2,0 értékre állítjuk, majd etilacetáttal sxtraháljuk, a szerves extraktumot szárazra pároljuk, a maradékot 0,05 m nátriumfoszfátpufferben oldjuk, az oldatot 30 percen át szobahőmérsékleten keverjük, majd etilacetáttal extraháljuk, az etilace- 40 tátos oldatot szárazra pároljuk, és a rifamicin R-t tartalmazó maradékot oszlopkromatográfiával tisztítjuk. 6. Az 1. és 3. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja a II képletű rifamicin P 45 - amely C =60,6% H = 6,2% N = 3,8% O =25,2% S =4,1% elemanalízis adatokkal, alábbi abszorpciós sávokkal (Lábra): U.V. és látható Metanol 0,1 n HCL *max (“V0 pi% cm \nax 8 1 táu *4 »4 « 1 i 406 197 416 183 350 (váll) 300 319 297 344 225 521 és a következő frekvenciáknál (cm“1), nujolban felvett, legjellegzetesebb infravörös abszorpciós csúcsokkal (2. ábra), 3700-3150, 3100, 3060-2800, 1465, 1380, nujol: 1722, 1645, 1580, 1510, 1325, 1250, 1160, 1130, 1070, 1030, 982, 960, 925 , 890, 818 , 770, 735, 70 eV-nál az M* molekuláris ioncsúcsot 738Ç értéknél mutató tömegspektrum adattal: 100 MHz-nél CDCl3-ban a 3. ábra szerinti NMR spektrummal, szilikagél lemezen 95 :5 arányú kloroform-metanol oldószer használata esetén 0,57 Rf-értékkel rendelkezik - a III képletű rifamicin Q — mely C = 60,7%, H = 6,3%, N = 3,60%, O =25,3%, S = 4,2%. elemanalízis adatokkal - abszorpciós sávokkal: , alábbi U.V. és látható pi% C1 cm 406 178 350 (váll) 297 305 257 405 224 518 és a következő frekvenciáknál (cm-1), nujolban felvett, legjellegzetesebb infravörös abszorpciós csúcsokkal (4. ábra): 3700-3300, 3300-3080, 3040-2780, 1460, 1378, nujol: 1740, 1700, 1650, 1605, 1555, 1510, 1315, 1275, 1240, 1220, 1160, 1090, 1050, 1020, 970, 945, 910, 808, 765, 720, 60 MHz-nél CDCl3-ban a 7. ábra szerinti NMR spektrummal, szilikagél lemezen 95:5 arányú Idoroform-metandaldószer-rendszer használata esetén 0,32 Rf-értékkel rendelkezik — és a rifamicin U — mely alábbi U.V. és látható abszorpciós sávokkal: \nax (nV1) cm 412 163 353 (váll) 299 265 258 389 220 451 257 423 224 550 a következő frekvenciáknál (cm“1), nujolban 65 felvett, legjellegzetesebb infravörös abszorpciós csúcsokkal: 12
