173751. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új rifamicin-származékok előállítására
3 173751 4 ayésztésével nancimicin nevű antibiotikum előállítását ismerteti, míg a 2 043 847 sz. francia szabadalmi leírás szerint rifamicin B-t és O-t állítanak elő Streptomyces tolypophorus tenyésztésével. A találmány szerinti új antibiotikus anyagokat a Streptomyces mediterránéi ATCC 13685 törzsből leszármaztatható mutáns törzsek termelik. Az új törzseket az ATCC 13685 törzsnek szokásom kémiai mutagén anyagokkal, így salétromossawal vagy nitrozo-guanidin-származékokkal, vagy fizikai mutagén anyagokkal, így Röntgen-sugarakkal vagy UV-besugárzással való kezeléssel kapcsoljuk. Az új mutáns törzseket J. E. Thiemann és munkatársai. Arch. Mikrobiol, 67, 147-155 (1969) folyóiratban leírt javaslatával egyezően inkább Nocardia fajként, mint Streptomyces mediterránéi fajként jelölik. Ej rifamicinokat termelő mutáns törzsek izolálása Streptomyces mediterránéi ATCC 13685 spóra-szuszpenzióját 1 mg/ml töménységű N-metil-N’-nitro-N-nitrozoguanidin-oldattal kezeljük 9,0-es pH-jú trisz(hidroximetil)-aminometán-pufferben 60 percig 28 °C-on. A mutagén-kezelt spórákat ezután mossuk és Bennett-agart tartalmazó Petri-csészékben szétterítjük, majd 14 napig 28 °C-on inkubáljuk. Az életben maradt telepeket izoláljuk és megvizsgáljuk olyan szempontból, hogy gátolják-e a Bacillus subtilis növekedését. A vizsgálatot úgy végezzük, hogy 4-8 mm átmérőjű, egyetlen telepet hordó, agar-korongot olyan Petri-csészébe viszünk, amely 7,2 pH-jú és előzőleg 2% (tf/tf) Bacillus subtilis-szel volt beoltva. 5 Ilyen körülmények között a rifamicin B gyakorlatilag inaktív és egy normál telep által termelt rifamicin B nem gátolja a Bacillus subtilis növekedését. Az alsó agarban, ahol egyes telepek mikrobaellenes hatással rendelkező új rifamicint 10 termelnek, az agar-lemez körül élesen elkülönülő növekedésgátló zónát hoznak létre. Ily módon három törzset izoláltunk és ezeket eredetileg D-2, MM 18-6 és M-36 belső kód-jellel láttuk el. E mikroorganizmusok mintáit az ATCC-nél letétbe 15 helyeztük, ahol Nocardia mediterranea ATCC 31064, Nocardia mediterranea ATCC 31065 és Nocardia mediterranea ATCC 31066 törzsekként kerültek azonosításra. 20 Az Uj Nocardia mediterranea törzsek leírása 25 Az 1. Táblázatban a Nocardia mediterranea ATCC 31064, 31065 és 31066 törzsek makroszkopikus és mikroszkopikus vizsgálatainak eredményeit tüntetjük fel. A 2. Táblázatban ugyanezen Nocardia mediterranea törzsek tenyésztési jellem- 30 zőit adjuk meg. Az eredeti Streptomyces mediterránéi ATCC 13685 (ME/83) törzs jellemzőit ugyancsak megadjuk. 1. Táblázat Telepek Légmicélium Spórák N. mediterranea ATCC 31064 (D-2) Kúp alakú-tölcséres és csavart, 2—3 mm átmérőjű vöröses-barna, okkersárga oldható pigmenttel rendelkező telepek. Szürkéstől pirosasig terjedő színű, elágazó, 0,6-0,8 pm átmérőjű Hengeres (0,08-1 pmx 3,0-5,0 p) N. mediterranea ATCC 31065 (MM 18-6) Kúp alakú-tölcséres és csavart, 2—3 mm átmérőjű, sötét-narancs, sötét-narancssárga oldható pigmenttel rendelkező telepek Rózsaszíntől világosnarancsig terjedő színű, elágazó, 0,6—0,8 pm átmérőjű Hengeres (0,8-1 pm x 3,0-5,0 p) N. mediterranea ATCC 31066 (M-36) Kúp alakú-tölcséres és csavart, 2-3 mm átmérőjű, narancsosbarna- aranysárga oldható pigmenttel rendelkező telepek. Rózsaszíntől pirosasnarancsig terjedő színű, elágazó 0,6—0,8 pm átmérőjű Hengeres (0,8-1 pm x 3,0-5,0p) Streptomyces mediterránéi ATCC 13685 Kúp alakú-tölcséres és csavart 2-3 mm átmérőjű, narancssárga, világos aranysárga Pirosas, elágazó 0,6—0,8 pm átmérőjű Hengeres (0,08-1 pm x 3,0—5,0 p) ME/83 oldható pigmenttel rendelkező telepek. 2
