173703. lajstromszámú szabadalom • Eljárás oxitetraciklin előállítására
11 173703 12 A leírt módon mélykult lírában készített tenyészeteket —10°C-on lefagyasztottuk és felhasználásukig ezen a hőmérsékleten tároltuk. A leírt módon mélykultúrában készített tenyészetekből (felolvasztás után) 1 ml-t 3% Tween—80- 5 -at tartalmazó desztillált vízzel 10 000-szeresre hígítottunk. A higításokból 2-2 ml-t Blacke üvegben elkészített, R-l jelű spóráztató táptalajra oltottunk. A beoltott tenyészeteket 28°C-on 4 napig 10 inkubáltuk. Ekkor fehéren spórásodott az R-l jelű táptalajon megjelenő monokultúrák 98%-a, mig kékes-szürkén spórásodott a monokultúrák 2%-a. A fehéren spórásodott ráncos telepek hátlapján vízben oldódó fekete pigment volt megfigyelhető. 15 A gyors spórásodás mellett szembetűnő volt a monokultúrák morfológiai homogenitása. A spórás monokultúrákat kémcsövekben elkészített R—1 jelű táptalajra izoláltuk (1 monokultúrából 6 db ferde-agar tenyészet), majd 28°Con 20 9 napig inkubáltuk. A spórás ferde-agar tenyészeteket rázott szintű tenyésztéssel - TI—21 és TF-25 táptalajon — minősítettük. Átlagosan 98 db olyan monokultúra jutott 25 100 db levizsgált monokultúrára, melynek termelőképessége a kiindulási monokultúra eredeti termelőképességét mutatta és amelyekből üzemi oltóspórát közvetlenül lehet készíteni. A magas termelőképességű monokultúrából 1 éve 30 készített liofilizált spórakonzervből a példában leírt módon készült, oltóanyagkészítésre alkalmasnak talált ferde-agar alaptenyészet egyik kémcsövének spóráiból az 1. példában leírt módon mélykultúrás tenyésztéssel R—12 és R—11 jelű tápfolyadékban 35 készítettünk oltóanyagot. A leírt módon mélykultúrában készített oltóanyagokat mind rázott, mind üzemi szintű tenyésztéssel — TI—21 és TF—25 tápfolyadékban - minősítettük. 40 Az oltóanyagok rázott szintű termelőképessége 120 órás rázott fermentációk esetén 9,8 g/liter oxitetraciklin volt. Ez a kiindulási monokultúra eredeti termelőképességének 98%-a. Az oltóanyagok üzemi szintű termelőképessége 45 115 órás fermentációk esetében 9,6kg/m3 oxitetraciklin és az e fermentléből az 1. példában leírt módon kinyert komplex só vízmentes oxitetraciklin bázis tartalma 4,8 kg/m3 volt. 50 6. példa A magas termelőképességű monokultúrából 1 éve készített liofilizált spórakonzervből az 5. példában leírt módon készült, oltóanyagkészítésre alkalmas- 55 nak talált ferde-agar alaptenyészet egyik kémcsövének spóráiból a 2. példában leírt módon készítettünk kölesen oltóanyagot. A kölesre átvitt spórák különösen intenzív növekedést és spórásodást mutattak, ezáltal csökkent a spóragenerációk száma. A spórásodás átlagos időigénye 14 nap volt. A leírt módon kölesen készített oltóanyagokat mind rázott, mind üzemi szintű tenyésztéssel — TI-21 és TF-25 tápfolyadékban - minősítettük. Az oltóanyagok rázott szintű termelőképessége 120 órás rázott fermentációk esetén 9,8 g/liter oxitetraciklin volt. Ez a kiindulási monokultúra eredeti termelőképességének 98%-a. Az oltóanyagok üzemi szintű termelőképessége 115 órás fermentációk esetén 11,6 kg/m3 oxitetraciklin, és az e fermentléből az 1. példában leírt módon kinyert komplex só vízmentes oxitetraciklin bázis tartalma 5,4kg/m3 volt. Az így elért eredmény a kinyert komplex só vízmentes oxitetraciklin bázis tartalmára vonatkoztatva az 1. példában leírt eljárás eredményétől 2. példában leírt eljárás eredményétől 3. példában leírt eljárás eredményétől 4. példában leírt eljárás eredményétől 5. példában leírt eljárás eredményétől volt magasabb. 31,70%-kal, 61,19%-kal, 45,94%-kal, 63,63%-kal, 12,50%-kal Szabadalmi igénypont: Eljárás oxitetraciklin előállítására, azzal jellemezve, hogy az OKI-nél 65/1971. letéti számon elhelyezett Streptomyces rimosus törzs magas termelőképességű monokultúráiból, vagy ezek spórakonzerveiből úgy készítünk üzemi oltóspórát, hogy tenyésztési-felszaporítási lépéseket 2 - 6 x 10“3 g/100 ml akriflavint (3,6-diamino-l0- -metilakridinium klorid és 3,6 -diaminoakridin keveréke) tartalmazó tápfolyadékban mélykultúrás tenyésztéssel végzünk, majd ismert módon oltóspórát készítve és aerob fermentációt végezve, a fermentl&ől az oxitetraciklmt kinyerjük. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 794269 — Zrínyi Nyomda 6
