173703. lajstromszámú szabadalom • Eljárás oxitetraciklin előállítására
7 173703 8 Kalcium-karbonát 03% Pálmaolaj 2 csepp pH sterilezés előtt: 7,0 A beoltott tenyészeteket 28°Con, sík rázóasztalon - melynek kilengési diametere 32 mm volt - 54 órán át rázattuk. Ekkor a tenyészetek 100%-os fragmentációt értek el. A leirt módon mélykultúrában készített tenyészeteket —10°C-on lefagyasztottuk és felhasználásukig ezen a hőmérsékleten tároltuk. A leírt módon mélykultúrában készített oltóanyagokat mind rázott, mind üzemi szintű tenyésztéssel TI—21 jelű, alábbi összetételű inokulum, és TF—25 jelű, alábbi összetételű főfermentációs tápfolyadékban minősítettük: TI—21 jelű tápfolyadék összetétele: Szójaliszt 2,0% Keményítő 43% Nátrium-klorid 03% Kálium-klorid 0,2% Mangán-szulfát-víz(l /2) 0,01% Kobalt-dinitrát 0,004% Bórsav 0,005% Kálium-dihidrogén-foszfát 0,02% Kalcium-karbonát 0,5% Pálmaolaj 03% pH sterilezés előtt: 7,0 TF-25 jelű tápfolyadék összetétele: Kukoricaliszt 11,0% Szójaliszt 03% (Di)ammónium-szulfát 0,65% Mangán-szulfát-víz(l 12) 0,008% Kobalt-diklorid-víz(l /6) 03008% Kálium-dihidrogén-foszfát 032% Kalcium-karbonát 03% Pálmaolaj 03% pH sterilezés előtt: 63 Az oltóanyagok rázott színtű termelőképessége 120 órás rázott fermentációk esetén 8,8 g/liter oxitetraciklin volt. Ez a kiindulási monokultúra eredeti termelőképességének - amit a monokultúra egy részletének közvetlenül TI—21 és TF—25 tápfolyadékban rázott tenyésztéssel határoztunk meg - 88%-a. Az oltóanyagok üzemi szintű termelőképessége 115 órás fermentációk esetében 8 kg/m3 oxitetraciklin volt és az e fermentléből a vízmentes oxitetraciklin bázist az alábbi ismert módon nyertük ki: 115 órás korban a teljes fermentlé térfogat pH-ját 2,0-ra állítottuk 25%-os kénsavval, 30 percig kevertettük, majd szűrtük. A micéliumot 20% vízzel átmostuk, majd a mosóvizet a szűrtlével egyesítettük. Ezután 0,05% kalcium-dikloridot adtunk hozzá kevertetés közben, majd ammónium-hidroxiddal a pH-t 6,0-ra állítottuk be. Ezután 0,25% nátrium-hidiogénkarbonátot adtunk hozzá, újra kevertettük 30 percig, a pH-t ammónium-hidroxiddal .tovább emeltük 9,0 értékig. Félórai kevertetés után a kicsapott komplex sót szűrtük. A kiszűrt csapadékot 50°C hőmérsékleten áramló levegővel szárítottuk. A fentiek szerint előállított komplex só vízmentes oxitetraciklin bázis tartalma 4,1 kg/m3 volt. 2. példa A magas termelőképességű monokultúrából készített liofllizált spórakonzei v spóráit 3 ml Tween-80-at tartalmazó, 100 ml desztillált vízben szuszpendáltuk, a kapott spóraszuszpenzió 5 ml-eit steril kölesre oltottuk. (A köles készítése: 50 g kölest 500 ml-es Erlenmeyer-lombikban levő 40 ml vízzel duzzasztottunk, majd 12 órás szünettel kétszer 60 percig 120°C-on sterileztünk.) A beoltott tenyészeteket 28°C-on — 2 naponkénti átrázogatás mellett — spóráztattuk. A spórásodás átlagos időigénye 31 nap volt. A leírt módon kölesen készített oltóanyagokat mind rázott, mind üzemi szintű tenyésztéssel — TI—21 és TF—25 tápfolyadékban — minősítettük. Az oltóanyagok rázott szintű termelőképessége 120 órás rázott fermentációk esetén 6,95 g/liter oxitetraciklin volt. Ez a kiindulási monokultúra eredeti termelőképességének 69,5%-a. Az oltóanyagok üzemi szintű termelőképessége 115 órás fermentációk esetében 6,6 kg/m3 oxitetraciklin és az e fermentléből az 1. példában leírt módon kinyert komplex só vízmentes oxitetraciklin bázis tartalma 335 kg/m3 volt. 3. példa A magas tarmelőképességű monokultúrából 1 éve készített liofilizált spórakonzerv spóráit 03 ml Tween—80-at tartalmazó 10 ml desztillált vízben szuszpendáltuk, a kapott spóraszuszpenzió 5 ml-ét 100 ml térfogatú 500 ml-es Erlenmeyer-lombikban elkészített R—12 jelű tápfolyadékba oltottuk. A beoltott inokulumot 28°Con, sík rázóasztalon - melynek kilengési diametere 32 mm volt -5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
