173664. lajstromszámú szabadalom • Eljárás emberi antistaphilococcus immunglobulin előállítására
7 173664 8 tése céljából. A kapott plazmát a frakcionálás előtt fagyasztott állapotban lágy PVC zsákokban (—20)—(—30) °C-on tároljuk. A gammaglobulin frakció kivonásához 10 liter hiperimmun antistaphylococcus plazmát etilalkohollal addig kezelünk, amíg az alkoholkoncentráció a plazmában 8% lesz —3 °C hőmérsékleten, a pH érték pedig 7,2. Eközben fibrinogén válik ki, amit eltávolítunk. A folyadékot etilalkohollal addig kezeljük, amíg annak koncentrációja 25% lesz a keverékben -5 °C hőmérsékleten, a pH érték pedig 6,9 lesz. A kiváló csapadék tartalmazza a béta- és gammaglobulin legnagyobb mennyiségét. A csapadékot leválasztjuk, 15 és a megmaradó folyadékot ismételten etilalkohollal kezeljük. A második és harmadik kicsapódásnál keletkező csapadékot szuszpendáljuk, mégpedig 500 grammot 500 ml 0 °C-ra lehűtött 2%-os nátriumklorid oldatban. A kapott szuszpenzióhoz 20 750 ml 0 °C-ra lehűtött desztillált vizet adunk hozzá. Ezután megmérjük a kapott keverék térfogatát, majd keverés közben 1 Éter szuszpenzióhoz 1,5 liter 0 °C-ra lehűtött acetát-puffert (11,5 ml kétmólos CH3COOH oldatot, 11,5 ml 25 kétmólos CH3COONa oldatot) adunk hozzá. A szuszpenzióban a gH értéket 5,0—5,1-re állítjuk be. A keveréket 0 X hőmérsékleten 12 óra hosszat állni hagyjuk. Ilyen feltételek között kiválik a protrombin csapadék, amelyet 20 000 fordulat/perc 30 sebességű szupercentrifugán 0 °C hőmérsékleten leválasztunk. A centrifugálással nyert anyagot 4 liter -3 °C-ra lehűtött 26%-os alkohollal kezeljük. A keverék pH álékét 1 mólos NaOH oldattal vagy 1 mólos HC1 35 oldattal 5,0-5,1 pH értékre állítjuk be. Az alkohol hozzáadásakor a keverék hőmérsékletét 0 °C-ról —4 °C-ra csökkentjük. Ezen feltételek mellett bétaglobulin, lipoid, profibrinolizin és kevés gammaglobulin válik ki. A 40 csapadékot szupercentrifugán -4°C hőmérsékleten leválasztjuk, és fibrinolizin előállításához használjuk fel. A centrifugálással nyert anyagot átlátszó filtrât um nyeréséhez papír péppel (-3)-(-5)°C hőmérsékleten szűrjük. Az átlátszó filtrátumban a 45 pH értéket egymólos NaHC03 oldattal 6,9-7,0-re növeljük. Ezután az oldat minden literéhez 0,16 liter- -15 °C-ra lehűtött 96%-os alkoholt adunk hozzá, aminek eredményeképpen az alkohol koncentrációja 25% lesz. A keverék hőmérsék- 50 leiének -9 °C-nak kell lenni. Ezen feltételek mellett immunglobulin válik ki, amit leválasztunk. A tisztított immunglobulin nyers csapadékát 150 gramm mennyiségben steril fiziológiás oldatba 5 visszük 1:1,5 arányban, majd 500 ml-es palackokba 200 ml-t töltünk, (—35)—(—40) °C-on megfagyasztjuk, és liofilizáljuk. A kiszárított antistaphylococcus immunglobulinból lázat nem okozó desztillált vízzel 10 vagy 16%-os oldatot készítünk. 10 100 gramm szárított porhoz 0,9 gramm NaCl-t adunk hozzá. A kapott oldatban a protein tartalmat refraktométerrel meghatározzuk, és szükség esetén fiziológiás oldattal 10 ± 1 súly%-ra állítjuk be. A kapott oldatot papírpéppel, majd a kamrákban sterilizáló kerámiagyertyákkal vákuumban szűrjük. A steril antistaphylococcus immunglobulin oldatot 3 ml-es ampullákba töltjük és az ampullákat leforrasztjuk. A hozam 10 liter immun plazmára számítva 80—100 dózis antistaphylococcus immunglobulin. A készítményben 1 ml antistaphylococcus immunglobulinban 50—640 antitoxikus egység (IE) van és az antistaphylococcus agglutinin tartalom titerben 1 :20480-ig terjed. Az előállított antistaphylococcus immunglobulin steril, lázat nem okozó, nem mérgező és specifikusan hatásos. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás emberi antistaphylococcus immunglobulin előállítására donor véréből izolált vérplazma etilalkohollal való frakcionálásával 0 °C alatti hőmérsékleten, majd a gammaglobulin frakció leválasztásával, tisztításával, szárításával, azzal jellemezve, hogy 7 napos időközökben 1,0, 1,0 és 2,0 ml-es staphylococcus anatoxin dózisokkal immunizált donorok véréből a plazmát plazmaforézis útján izoláljuk és önmagában ismert módon frakcionáljuk, majd a megfelelő frakcionálási lépésben a titerben 50—640 IE/ml Staphylococcus alfa antitoxin tartalmú és 1 :20480 antistaphyloooccus agglutinin tartalmú emberi antistaphylococcus immunglobulint ismert módon tisztítjuk, szárítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás továbbfejlesztése emberi antistaphylococcus immunglobulin gyógyszerkészítmény előállítására, azzal jellemezve, hagy a szárított, liofilizált immunglobulint fiziológiás vagy izotóniás oldatban feloldjuk. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 794265 - Zrínyi Nyomda 4
