173662. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ovulációt serkentő új nonapeptidamid-származékok előállítására
15 173662 16 Pro =1,00, Ala = 0,98, Leu = 0,97, Tyr = 094 (86,4%-os átlagos visszanyerés). 3. példa (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu--Arg-Pro-NH-CH2GH2-OH előállítása (a) Z-(D)-Ala-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2-CH2-OH 3 ml 20%-os, dioxánnal készült hidrogén-bromid-oldatban feloldunk 722 mg Z-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2-CH2-OH-t. Az oldatot ezután 60 percen át rázzuk, majd 30 ml vízmentes étert adunk hozzá. A képződött csapadékot dekantálás útján elkülönítjük, vízmentes éterrel mossuk és csökkentett nyomáson exszikkátorban nátrium-hidroxíd felett megszárítjuk. A kapott terméket ezután 5 ml dimetil-formamidban feloldjuk, majd az oldathoz 230 mg Z-(D)-Ala-OH-t és 210 mg HONB-t adunk. Jeges hűtés után az elegyhez először 0,16 ml trietil-amint, majd 230 mg DCC-t adunk. A reakcióelegyet ezután jeges hűtés közben 1 órán át, majd szobahőmérsékleten 4 órán át keverjük. Ezt követően a reakcióelegyet szűrjük, majd a szűrlethez 100 ml kloroformot adunk. Az így kapott oldatot először 4%-os vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, majd vízzel mossuk, vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk és csökkentett nyomáson bepároljuk. A maradékot kloroform, metanol és ecetsav 9 :1 :0,5 arányú elegyében feloldjuk, majd a kapott oldatot 3 cm átmérőjű és 40 cm magas, szilikagélből készült oszlopra felvisszük. Az oszlopot az előzőekben említett összetételű oldószereleggyel előzetesen átmossuk, illetve az eluálást is ugyanezzel az oldószereleggyel végezzük. A 0,47 R,-4 értékű frakciókat elegyítjük, majd csökkentett nyomáson szárazra pár óljuk és éterrel mossuk. így a por alakú cím szerinti vegyületből 640 mg-ot kapunk. Fajlagos forgatóképesség [a]56=-47,2° (c = 0,5, metanolban). Elemzési eredmények: C30H47O9N9 képlet alapján: számított: C =53,16%, H =699%, N = 18,60%, talált: C = 52,84%, H = 7,26%, N = 18,21%. Rf4= 0,47. (b) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NH-CH2 -CH2 -OH előállítása 10 ml ecetsavban az előző (a) lépésben kapott termékből 154mg-t katalitikusán redukálunk katalizátorként 100 mg palládiumkormot használva 5 órán át. Ezután a katalizátort kiszűrjük, majd a szűrletet csökkentett nyomáson betöményítjük. 10 ml víz és 0,45 ml In sósavoldat hozzáadása után a koncentrátumot liofilizáljuk. A por alakú liofilizátumot és 140 mg (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-OH-t feloldunk 10 ml dimetil-formamidban, majd a kapott oldathoz 60 mg HONB-t és N-etil-morfolin dimetil-formamiddal készült 10%-os oldatából 0. 25 ml-t adunk. A reakcióelegyet ezt követően —2 °C-ra lehűtjük, majd 60 mg DCC-t adunk hozzá. A reakcióelegyet ezután jeges hűtés közben 6 órán át, majd szobahőmérsékleten 12 órán át keverjük. Miután a reakció befejeződött, a dimetil-formamidot csökkentett nyomáson ledesztilláljuk és a maradékot 10 ml vízben feloldjuk. Az oldhatatlan részt kiszűrjük, a szűrletet pedig 1 cm átmérőjű és 4 cm hosszú, Amberlite IRA-410 (acetát formájú) gyantából készült oszlopon átbocsátjuk, amikor is a terméket a megfelelő acetáttá konvertáljuk. Ezt követően a sót az 1. példában ismertetett módon először karboximetil-cellulózból, majd Amberlite XAD-2 gyantából készült oszlopon tisztítjuk. Liofilizálás után 146 mg mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapjuk fehér pelyhes por alakjában. Fajlagos forgatóképesség [a]^5 = —48,10 (c = 0,5, 5%-os vizes ecetsavoldatban). Rf2=0,31, Rf1 = 0,025. Aminosav-elemzés (hidrolízis 5,7 normál sósavoldattal tioglikolsav jelenlétében): His=l,00, Arg =0,98, Trp = 098, Ser = 092, Giu = l,00, Pro = 1,00, Alá = 0,99, Leu =1,00, Tyr = 098 (87%-os átlagos visszanyerés). 4. példa (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NH-CH(CH3 )2 előállítása (a) Z{D)-Ala-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH(CH3)2 előállítása 720 mg Z-Leu-Arg(N02)-Pro-NH-CH(CH3)2-t a 2. példa (a) lépésében ismertetett módon kezeljük, majd Z-(D)-Ala-OH-val kondenzáljuk 5 ml dimetil-formamid és 10 ml diklór-metán egyében DCC és HONB felhasználásával. A kapott terméket végül etil-acetátban extraháljuk, amikor is bepárlás után 690 mg por alakjában a cím szerinti vegyületet kapjuk. Fajlagos forgatóképesség [a]“ = -48,3° (c=l,0, metanolban). Elemzési eredmények a C3iH4g08N9 képlet alapján: számított: C =55,18%, H =7,17%, N = 18,68%, talált: C =54,78%, H =7,09%, N = 18,22%. R,4= 0,61. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
