173662. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ovulációt serkentő új nonapeptidamid-származékok előállítására
9 173662 10 Táblázat folytatása Kontroll (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 (természetes LH-RH) 100% I. általános képletű His Tyr Leu 2-hidroxi-etilcsoport 4300% peptid His Tyr Leu izopropilcsoport 3600% His Phe Leu etilcsoport 5810% His Phe Leu n-propilcsoport 2900% His Tyr Nie etilcsoport 4800% His Phe De etilcsoport 3200% Tyr Tyr Leu etilcsoport 2010% p-NH2 -Phe Tyr Leu etilcsoport 2150% A találmány szerinti eljárást az alábbi példákkal kívánjuk közelebbről megvilágítani. A vékonyrétegkromatográfiás Rf értékkel kapcsolatban használt rövidítések arra utalnak, hogy a vizsgálatot szilikagél hordozón az alábbi oldószerrendszerekkel végezzük: Rf 1 : etilacetát : piridin : ecetsav : víz = 60 :20:6:10 i. példa Rf2 : n-butanol : etilacetát : ecetsav : víz = 1 :1 :1 :1 Rf3 : n-butanol : ecetsav : víz = 4 :1:1 Rf4 : kloroform : metanol : ecetsav = 9 :1 :0,5 A példákban használt márkanevek az alábbi anyagokat jelentik: Celite: a Johns-Manville amerikai egyesült 40 államokbeli cég által előállított szűrőanyag. Biogel P-2: a BIO-RAD amerikai egyesült államokbeli cég által gélszűréshez gyártott anyag. Cephadex LH-20: a Pharmacia Fine Chemicals svéd cég által gyártott, észterezett dextrángél. Amberlite XAD-2: polisztirol gyanta. Amberlite IRA-410: erősen bázikus ioncserélőgyanta (anioncserélő). Amberlite CG-410: erősen bázikus ioncserélőgyanta (anioncserélő). Amberlite CG-45: enyhén bázikus ioncserélőgyanta (anioncserélő). Az Amberlite márkanevű gyantákat a Rohm and Haas amerikai egyesült államokbeli cég állítja elő. 55 A találmányt közelebbről az alábbi kiviteli Példákkal kívánjuk megvilágítani. A kiviteli példákban az aminosav-elemzésnél említett „átlagos visszanyerés” alatt a peptidből a savas hidrolízissel 60 elméletileg nyerhető és a valóságban kapott aminosav-mennyiség százalékos viszonya értendő. Bz az érték azért kisebb a legtöbb esetben 100-nál, mert az amino sa vak egy része a savas hidrolízis során elbomlik és így nem mutatható ki. 30 (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása (a) (Pyr)Glu-His-Trp-Ser-Tyr-OH 35 100 ml metanolban feloldunk 8,0 g Z-Ser-Tyr - -OMe-t, majd a kapott oldathoz 500 mg palládiumkormot adunk. Az oldaton ezután a környezet hőmérsékletén és atmoszférikus nyomáson 4 órán át hidrogéngázt vezetünk keresztül. Ezt követően a katalizátort kiszűrjük, majd a szűrletből a metanolt csökkentett nyomáson és alacsony hőmérsékleten ledesztilláljuk. A kapott maradékot 30 ml dimetil-formamidban feloldjuk. Az így kapott oldathoz 45 (Pyr)Glu-His-Trp-OH kristályaiból 6,78 g-ot adunk, majd az oldatot jeges fürdővel lehűtjük. Az oldathoz ezután 5,4 g HONB-t és 5,0 g DCC-t adunk és a reakcióelegyet először jeges fürdőn 8 órán át, majd szobahőmérsékleten 10 órán át keverjük. A képződött diciklohexil-karbamid mellékterméket kiszűrjük, majd a szúTletet csökkentett nyomáson betöményítjük. A betöményített elegyhez 100 ml étert adunk, majd a kivált csapadékot kiszűrjük, éterrel mossuk és szárítjuk. így 12,2 g terméket kapunk. Ezt a terméket feloldjuk etil-acetát, piridin, ecetsav és víz 60 : 20 : 6 :10 arányú elegyében. Az így kapott oldatot ezután felvisszük egy 6,5 cm átmérőjű és 19 cm hosszú, szilikagélből a fenti összetételű oldószerei eggyel készült oszlopra, majd az oszlopot ugyanezzel az oldószereleggyel eluáljuk. Az eluátum 1480 ml és 1800 ml közötti frakciójában jelenik meg a (Pyr)Glu-His-Trp-Ser- 65 -Tyr-OMe. Ezt a frakciót ezután csökkentett 5
