173662. lajstromszámú szabadalom • Eljárás ovulációt serkentő új nonapeptidamid-származékok előállítására
29 173662 30 Elemzési eredmények a C5oH7 30i3N13 -2H20 képlet alapján: számított: C = 54,58%, H = 7,06%, N = 16,55%, talált: C = 54,84%, H = 6,90%, N = 16,54%. (e) BOC-p-NH-Z-Phe-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása 2-Merkaptoetanol jelenlétében szobahőmérsékleten 560 mg BOC-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg-(N02)-Pro-NH-CH2-CH3-t 5 ml trifluor-ecetsavval keverünk 30 percen át, majd az elegyhez étert adunk. A képződött csapadékot kiszűrjük, majd nátrium-hidroxid felett szárítjuk exszikkátorban. A terméket ezután 5 ml dimetil-formamidban feloldjuk, majd a kapott oldatot 0,1 ml N-etil-morfolinnal semlegesítjük. Ehhez az oldathoz ezután 217 mg BOC-p-NH-Z-Phe-OH-ból és 145 mg HONB- ből a DDC-módszerrel előálh'tott BOC-p-NH-ZPhe-ONB dimetil-formamidos oldatát adjuk. A reakcióelegyet 12 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk, majd az oldószert ledesztilláljuk. A maradékhoz etil-acetátot adunk, majd a képződött csapadékot kiszűrjük, így 518 mg mennyiségben a 119-120°C olvadáspntú (bomlik) cím szerinti vegyületet kapjuk. Rf4= 0,37. Fajlagos forgatóképesség [a]“ =-29,7° (c = 0,6, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C67H890isN15 • 2H20 képlet alapján: számított: C = 58,29%, H = 6,65%, N = 15,22%, talált: C =58,18%, H=6,69%, N = 14,81%. (f) (Pyr)Glu-p-NH2-Phe-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg(N02 )-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása 2-Merkaptoetanol jelenlétében 470 mg BOC-p-NH2 -Z-Phe-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg(N02)Pro-NH-CH2 -CH3 -t szobahőmérsékleten 30 percen át trifluor-ecetsawal keverünk, majd a keverékhez étert adunk. A képződött csapadékot kiszűrjük, majd nátrium-hidroxid felett exszikkátorban szárítjuk. A csapadékot ezután 6 ml dimetil-formamidban feloldjuk, majd a kapott oldatot 0,045 ml N-etil-morfolinnal semlegesítjük. Az oldathoz ezután 185 mg IBOC-(Pyr)Glu-OSu-t adunk, majd szobahőmérsékleten 48 órán át állni hagyjuk. Az oldószert ezután ledesztilláljuk, és a maradékot etil-acetáttal eldörzsöljük. A képződött port kiszűrjük. így 425 mg IBOC-(Pyr)Glu-p-NH-Z-Phe-Trp-Ser-Tyr-(D)- Ala-Leu-Arg(N02 )-fro-NH-CH2 - -CH3-t kapunk, amelynek Rf4-értéke 0,28. Ebből a termékből 375 mg-ot 5 ml vízmentes hidrogén-fluoriddal kezelünk 2-merkaptoetanol és anizol jelenlétben 0 °C-on 1 órán át. A hidrogén-fluorid desztilláció útján végzett eltávolítása után a maradékot vízben feloldjuk és a vizes oldatot éténél extraháljuk. A vizes oldatot ezután 0,9 cm átmérőjű és 15 cm hosszú, Amberlite IRA-410 (acetát formájú) gyantából készült oszlopon átbocsátjuk. Az eluátumot és a vizes mosófolyadékokat elegyítjük, majd liofílizáljuk. A liofilizált terméket ezután feloldjuk 0,005 mólos ammónium-acetát-pufferben, majd a kapott oldatot 1,8 cm átmérőjű és 19 cm hosszú, karboximetil-cellulózból készült oszlopra felvisszük. Az eluálást lineáris gradiens-módszerrel végezzük 300 ml 0,005 mólos és 300 ml 0,2 mólos ammónium-acetát-puffert használva. A 90 ml és 140 ml közötti frakciókat összeöntjük, majd liofílizáljuk. így 170 mg mennyiségben a cím szerinti vegyületet kapjuk. Rf* = 0,16. Fajlagos forgatóképesség [a]“ =-41,8° (c = 0,56, 5%-os ecetsavoldatban). Elemzési eredmények a C58H78012N15 • 3CH3COOH • 4H20 képlet alapján: számított: C =53,77%, H =6,91%, N = 14,70%, talált: C = 54,09%, H = 6,58%, N = 14,84%. Aminosav-elemzés (hidrolízis 5,7 n sósavoldattal 4% tioglikolsav jelenlétében 110 °C-on 24 órán át): Arg = 0,97, Trp = 0,84, p-NH2-Phe = 0,97, Ser = l,00, Glu= 1,00, Pro = 0,99, Alá =1,02, Leu = 1,02, Tyr = 1,08 és etil-amin = 1,00. 10. példa (Pyr)Glu-Trp-Trp-Ser-Tyr-(D)-Ala-Leu-Arg-Pro-NH-CH2 -CH3 előállítása (a) Z-(Pyr)Glu-Trp-OBzl előállítása 1,7 g Z-(Pyr)Glu-ONB és 2,1 g H-Trp-OBzl-p-toluol-szulfonát 50 ml acetonitrillel készült oldatához 0,61 ml trietil-amint adunk, majd a reakcióelegyet 12 órán át szobahőmérsékleten keverjük. A reakcióelegyet ezután vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot 100 ml etil-acetátban feloldjuk, a kapott oldatot 1 n sósavoldattal és 5%-os vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal mossuk, vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk és szárazra pároljuk. A maradékot először petroléterből kristályosítjuk, majd etil-acetát és petroléter elegyéből átkristályosítjuk. így 1,7 g mennyiségben a 129—130 °C olvadáspontú cím szerinti vegyületet kapjuk. Rf4= 0,42. Fajlagos forgatóképesség [a]£s = +3,1 (c=l, dimetil-formamidban). Elemzési eredmények a C31 H2906N3 képlet alapján: számított: C =69,00%, H =5,42%, N = 7,79%, talált: C =68,85%, H =5,48%, N = 7,53%. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 15
