173603. lajstromszámú szabadalom • Eljárás A-28086 jelű antibiotikumok előállítására
27 173603 28 Az A 28 086 antibiotikumok előállítására használt Streptomyces aureofaciens tenyészeteket a Northern Marketing and Nutrition Research Division, U.S. Department of Agriculture, Agricultural Research Service, Peoria, Illinois, 61 604 törzsgyűjteményében letétbe helyeztük, ahonnan NRRL5758 és NRRL8092 számon bárki számára hozzáférhető. A Streptomyces aureofaciens NRRL5758 vagy Streptomyces aureofaciens NRRL 8092 tenyésztésére egy sor táptalajt használhatunk. A gazdaságos termelés, a legmagasabb kitermelési százalék és a termék elkülönítésének egyszerűsége miatt azonban bizonyos táptalajok előnyösek. így például szénforrásként a nagyobb térfogatban végzett fermentációk esetén tápióka-dextrint és sz->'harózt használunk, bár adhatunk a táptalajhoz glükózt, kukoricakemenyítőt, fruktózt, mannózt, maltózt stb. is. A kukoricaolaj, földimogyoróolaj, szójaolaj és nalolaj szintén használható szénforrások. Nitrogénforrásként előnyösen enzimesen hidrolizált kazeint használunk, de például peptonokat, szójalisrtet, gyapot mag-lisztet, amincsavat, például gluta;ninsavat is adagolhatunk a táptalajhoz. Azok közül a szervetlen sók közül, amelyeket hozzáadhatunk a táptalajhoz, megemlítjük a nátrium-, magnézium-, kalcium-, ammonium-, klorid-. karbonát-, szulfát-, nitrátionokra stb. disszociáló oldhat ó sókat. Tartalmazhat a táptalaj a mikroorganizmus növekedésébe*. és fejlődéséli ez szükséges esszenciális nyomelemeket. Ezek az elemek szennyezőanyagként a taptuiaj többi összetevőiében rendszerint elegendő mennyiségben tannal; jelen ahhoz, hogy a mikroorganizmus ncvetcedéie biztosítva iégvén. Ha a nagyonb térfogatú fermentációkkor a habzás .lebézsé-ekat okoz, úgy szükségessé válhat kevés (példád 0,2 ml/liter) habzásgátló, mini példád pdipiopilén-glikol adcgolása Bar ez nem alapvetően lényeges, az A 28 086 aiUibioreuinoKat termeid Streptomyces aweofaciens törzsek terrreloképessége fokozható kévés olaj, például szójsbabolaj adagolásával Az \ 28 086 antibiotikumokat nagy mennyiségben süllyesztett, levegőztetett fermentációs körű' mények között lankier mentorban állítjuk elő. Kevés A 28 086-komplex előállítására rázott tenyészeteket indítunk. Mivel a nagy térfogatú fermentorokban az antibiotikum termelése log-fázis után indul meg. ha az oltást a mikroorganizmus spóráival végezzük, előnyösen úgy járunk el, hogy vegetatív tenyészettel inokulálunk. A vegetatív inokulum előállítására kismennyiségü táptalajt oltunk a frissen készült, aktívan növő mikroorganizmus spóráit vagy micéliális fragmentjeit használva. A vegetatív inokulummal oltjuk a nagy tankfermentort. A vegetatív inokulum tenyésztésére használt táptalaj összetétele hasonló, de más is lehet, mint a tankfermentorban levő táptalajé. Az A 28 086 antibiotikumokat termelő mikroorganizmust 20°C és 40°C közötti hőmérsékleten tenyészthetjük. Az A 28 086 legnagyobb mennyiségben 27cC és 30°C közötti hőmérsékleten szintetizál ódik. Ahogy az az aerob, süllyesztett tenyésztéseknél szokásos, a táptalajon steril ievegőt buborékoltaíunk át. A mikroorganizmus gyois növekedése akkor következik be, ha a termelő fér mentor táptalaj-térfogatára számítva percenként 0,1 térfogatnál több levegőt vezetünk át. Az A 28 086 antibiotikum-komplex akkor szintetizáiódik nagy mennyiségben, ha a táptalaj térfogatára számítva percenként 0,25 térfogatnál több levegőt vezetünk át a készüléken. Ha az oldott oxigén koncentrációja nagy, az antibiotikum-termelés nem csökken. A fermentáció során az antibiotikumok termelését az illető antibiotikumokra érzékeny mikroorganizmusokkal szemben, a tenyészlével vagy a micéiium extrakíumával végzett értékméréssel követjük. A találmány szerinti eljárással előállított antibiotikumokat Baciilus subtilis ATCC 6633 mikroorganizmussal szemben mérjük. A biológiai értékmérést ismert módon, agar-iemezeken, papírkorong-módszerrel végezzük. A beolcatlan táptalaj kezdeti pH-ja a használt táptalajtól függ. A pH-nak általában 6,0 és 7,5 között kell lennie. A fermentáció végén a táptalaj pH-ja rendszerint valamivel nagyobb, 6 5 és 8,0 közötti értéket ér el. Az antíbioíiicus aktivitás általában a fermentáció második napján mérhető. A maximális ar.iibiotikum-koncentiáció rendszerint a hatodik és a hetedik nap között mérhető. A süllyesztett, levegőztetett ferment Idus kórüímenyejc között való előállításuk után az előzőekben leírt A 28 086 antibiotikumok u fermentációs iparban általánosan használt módszerekkel különíthetők el a táptalajból. Az A 28 086 antibiotikumokat termelő mikroorganizmus által a fermentáció során termelt antibiotikumok mind a mi célúimon, mind a szűrt lében megtalálhatók. Az A 28 086 antibiotikumok lehető legteljesebb kinyerése érdekében ezért az egyes eljárásokat, köztük a szűrést, extiakciót és adszorpciós iaomatográfiát együttesen használhatjuk. Az A 28 086 antibiotikumoknak a teljes vagy szűrt tenyészléből való elkülönítésére előnyösen például eülacetátot használunk, de más. általánosan használt módszerek is alkalmasak. Az A 28 086 antibiotikum-komplex A, B és D összetevőinek elkülönítésére a találmány szerinti eljárás egyik előnyös kivitelezési változata szerint ügy járunk el. hogy a teljes tenyészlé pH-ját 3,0« állítjuk be. Ezen a pH-értéken az A 28 086 A, B és D komponensei a micéliumon vannak. A találmány szerinti eljárás egy másik előnyös kivitelezési változata szerint az A 28 086 antibiotikumok elkülönítésére egy hidrogénkarbonát-sót, például nátrium-hidrogénkarbonátot adunk a teljes 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 14
