173445. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új antibiotikum elegy előállítására
13 173445 14 VI. táblázat folytatása MIC meg/ ml Vizsgáland A-30912 antibiotikum A faktor B faktor D faktor E faktor Balstomyces dermatitidis 20 20 5 20 Histoplasma capsulatum 20 20 5 20 Az A—30912 antibiotikum faktorok gombaölő aktivitását in vivo kísérletekben is meghatároztuk. Az in vivo kísérleteket az alábbi módon végeztük. A vizsgálandó vegyület három adagját Candida albicans-szal megfertőzött egereknek adtuk be a megfertőzés után 0, 4 és 24 órával. A vizsgálandó vegyület által nyújtott védelmet ED50-értékként határoztuk meg [ez az a hatásos adag mg/kg-ban kifejezve, amely az egerek 50%-át megvédi, lásd Wick, W. és munkatársai: J. Bacteriol. 81. 233—235. (1961)]. Az A—30912 antibiotikum A faktor EDS0-értéke egereken Candida albicans-szal szemben intraperitoneális adagolás esetén 30 mg/kg, szubkután adagolás esetén pedig 50 mg/kg. Az A—30912 antibiotikum D faktor EDS0-értéke pedig egereken, szintén Candida albicans-szal szemben szubkután adagolás esetén 33 mg/kg. Egy későbbi összehasonlító vizsgálat egerekben Candida albicans-szal szemben a következő EDS0 értékeket mutatta: A faktor: 75 mg/kg, B faktor: 62 mg/kg és D faktor: nincs aktivitás, szubkután adagolás esetén. Nem jelentkezett akut toxieitásra utaló jel, amikor az A- 30912 antibiotikum A faktort egereknek intraperitoneálisan (ip.) vagy szubkután (se.) adagoltuk naponta kétszer, három napon át, 100 mg/kg adagokban (összesen 600 mg/kg mennyiséget). Akkor sem volt megfigyelhető akut toxieitásra utaló jel, amikor az A-30911 antibiotikum A faktort napi három alkalommal 200 mg/kg mennyiségben adagoltuk egereknek intraperitoneálisan (összesen 600 mg/kg). Az akut toxieitás jelei akkor sem jelentkeztek, amikor az A-30912 antibiotikum D faktort szubkután adtuk be egereknek naponta háromszor 14 mg/kg mennyiségben (összesen 42 mg/kg). Gombaölőszarként alkalmazva az A—30912 faktorokat parenterálisan adagoljuk, általában valamely gyógyászatilag elfogadható hordozóanyaggal vagy hígítószerrel együtt. Az A-30912 antibiotikum faktor beadagolt mennyisége számos tényezőtől függ, így a fertőzés természetétől és súlyosságától. A találmány szerinti eljárás foganatosítását az alábbi példákkal szemléltetjük. 1. példa A) Fermentálás rázólombikban Az Aspergillus rugulosus NRRL8113 törzsből kultúrát készítettünk és az alábbi összetételű, 18 x 150 ml ferde agaron tartottuk fenn: Alkotórész Mennyiség (%) Dextrin 1,0000 kazein enzimes hidrolizátumax 0,2000 élesztő extraktum 0,1000 marhahús kivonat 0,1000 kálium klorid 0,0200 magnézium-szulfát (7 H20) 0,0200 vas(II)-szulfát (7 H20) 0,0004 víz 98,5596 x N-Z-Amine A, Sheffield Chemical Co., Norwich, N.Y. A ferde kultúrát Aspergillus rugulosus NRRL8113 törzzsel inokuláltuk, és az inokulált ferde kultúrát körülbelül 7 napon át inkubáltuk 25 C°on. A kifejlődött ferde kultúrát marhahús szérummal fedtük be, és steril kaccsal megkarcoltuk, hogy fellazítsuk a spórákat. A keletkező szuszpenzió felét használjuk fel az alábbi összetételű vegetatív közeg 50 ml-ének az inokulálására: Alkotórész Mennyiség (%) Szacharóz 2,5 melasz 3,6 kukoricaáztatóvíz 0,6 kazein enzimes hidrolizátumax 1,0 dikálium-hidrogén-fo szfát 0,2 víz 92,1 x N-Z-Case, Sheffield Chemical Co., Norwich, N.Y. Az inokulált vegetatív közeget 24 órán át inkubáltuk 25 C* hőmérsékleten. 250 ml-es szélesszájú Erlenmeyer-lombikban olyan rázógépen, amely 5 cm átmérőjű köríven forgott 250 fordulat/perc sebességgel. Ezt az inkubált vegetatív közeget közvetlenül felhasználhatjuk a vegetatív közeg második fejlődési fokozatának inokulálására. Eljárhatunk úgy is, és ez az előnyös, ha folyékony nitrogén gőzfázisban tartva tároljuk a kultúrát későbbi felhasználás céljára. Az üyen tárolás céljából a kultúrából több kis ampullát töltünk meg az alábbi módon: mindegyik ampullába az inkubált vegetatív közeg 2 ml-ét és 2 ml alábbi összetételű glicerin-laktóz-oldatot helyezünk: 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 7
