173410. lajstromszámú szabadalom • Javított baktériumtáptalajt és timidin-foszforilázt tartalmazó kompozició, baktériumok folsav-antagonistákkal szemben mutatott érsékenységének kimutatására, továbbá eljárás a kombozició és az enzim előállítására
13 173410 14 A kapott eredmények azt mutatják, hogy amikor timidin-foszforilázt viszünk be baktériumok trimetoprimmal szembeni érzékenységének kimutatására szolgáló közegekbe, a jelenlevő zavaró anyag - a timidin — olyan módon változik meg, hogy megszűnik a trimetoprim-antagonista hatása. Ennek következtében pontosan meghatározható a trimetoprim minimális gátlási koncentrációja. A timidin■foszforiláz tehát jelentősen alkalmasabbá teszi a szóbanforgó közegeket az érzékenység vizsgálatára. Szabadalmi igénypontok: 1. Javított, táptalajt és timidin-foszforilázt tartalmazó kompozíció baktériumok, előnyösen Streptococcus pyogenes, Staphylococcus aureus, Vibrio comma, Erysipelothrix rhusiopathiae, Serratia marcescens, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella aerogenes, Salmonella typhosa, Escherichia coli, Shigella flexneri, Shigella dysenteriae, Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae, Citrobacter freundii, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Proteus rettgeri és Pseudomonas aeruginosa fólsav-antagonistákkal szemben mutatott érzékenységének kimutatására, azzal jellemezve, hogy a kompozíció baktérium-táptalajt valamely Escherichia coli törzs tenyészetéből előállított, tisztított timidin-foszforilázzal kombinálva tartalmaz. 2. Az 1. igénypont szerinti kompozíció kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy a tápközeg timidin-foszforiláz-koncentrációja 2-200 egység enzim-aktivitás/ml táptalaj. 3. A 2. igénypont szerinti kompozíció kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy a tápközeg timidin-foszforiláz-koncentrációja 5-100 egység enzim-aktivitás/ml táptalaj. 4. A 2. igénypont szerinti kompozíció kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy a tápközeg timidin-foszforiláz-koncentrációja 7—50 egység enzim-aktivitás/ml táptalaj. 5. Az 1. igénypont szerinti kompozíció kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy az Escherichia coli B-96'(ATCC 13473) törzs tenyészetéből előállított timidin-foszforilázt tartalmazza. 6. Az 1—5. igénypontok bármelyike szerinti kompozíció kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy baktérium-táptalajként Mueller-Hinton-lét, Mueller-Hinton agart, Oxoid érzékenységi próba lét, Oxoid 5 érzékenységi próba agart, Wellcotest érzékenységi próba agart, agy-szív infúziós lét, agy-szív infúziós agart vagy tripton szója agart tartalmaz. 7. Eljárás az 1. igénypont szerinti kompozí-10 cióban alkalmazott baktérium-eredetű, tisztított, adott esetben stabilizált timidin-foszforiláz-készítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy az Escherichia coli törzs tenyészetéből a sejteket centrifugáljuk, szuszpendáljuk, feltárjuk, újra centrifugál-15 juk, és a kapott sejt-extraktumot tisztítjuk, azaz ekvivalens mennyiségű kalcium- és foszfát-ionokat tartalmazó kalciumfoszfát-gélen adszorbeáltatjuk, foszfát-pufferrel eluáljuk, továbbkromatografáljuk és dializáljuk, és adott esetben a legalább 5 mg 20 protein/ml tartalmú koncentrált foszfát-pufferes enzim-oldathoz előnyösen 10% ammóniumszulfátot adunk. 8. A 7. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy Escherichia coli törzs-25 ként Escherichia coli B—96 (ÁTCC 13473) törzset alkalmazunk. 9. A 7. vagy 8. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jeÜemezve, hogy a kalcium-foszfát-gélről eluált anyagot dietilaminoetil-30 -(DEAE)-cellulózra és/vagy epiklórhidrin-trietanolamin-(ECTEOLA)-cellulózra adszorbeáljuk. 10. A 9. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a sejt-extraktumot a dietüaminoetil-(DEAE)-cellulózról történt eluálás 35 után és az epiklórhidrin-trietanolamin-(ECTEOLA)-cellulózra történő adszorpció előtt dializáljuk. 11. A 7-10. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a dialízist víz és/vagy valamely puffer-oldat alkal-40 mazásával végezzük. 12. Eljárás az 1—6. igénypontok bármelyike szerinti kompozíció előállítására, azzal jellemezve, hogy a valamely Escherichia coli törzs tenyészetéből előállított, tisztított timidin-foszforilázt elke-45 verjük a baktérium-táptalajjal. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 794192 - Zrínyi Nyomda 7
