173366. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szteroidok mikrobiológiai oxidálására
15 173366 16 juk, majd lehűtjük. Ezután a közeget beoltjuk Arthrobacter simplex (IÁM 1660} mikroorganizmussal és 48 óra hosszat 28°-on rázógépen inkubáljuk. Az oltóközeggel azonos összetételű főfermentációs táptalajt állítunk elő, de hozzáadjuk a VI. táblázatban megadott mennyiségű és koncentrációjú zsírt és olajos maglisztet. A táptalaj pH-értékét nátriumhidroxiddal 7,0-re állítjuk be. 50 ml táptalajt 500 ml-es rázólombikba helyezünk, és 20 percig 120°-on sterilizáljuk, majd lehűtjük. Ezután a lombikot a kapott 2 ml oltótenyészettel beoltjuk, és 7 cm löketű rázógépen inkubáljuk. A főfermentációt 30°-on kezdjük. Az inkubáció kezdetétől számított 20. órában hozzáadjuk 150 mg koleszterin 2 ml vízzel készült szuszpenzióját, majd az inkubáció kezdetétől számított 28. órában 6,2 mg 2,2’-dipiridilt adunk hozzá. A 2,2’-dipiridil hozzáadása utáni 85. órában az inkubációt megszüntetjük és a fermentlevet 150 ml etilacetáttal extrahál- 5 juk. Az etilacetátos kivonatot bepároljuk, a maradékot kovasavgélen kromatografáljuk és 1:1 arányú benzol-aceton eleggyel eluáljuk. Az ADD-t a közbülső oxidációs termékektől és a kiindulási szteroidtól elválasztjuk. Az ADD kitermelését a VI. táblázatban ad- 10 juk meg. A kísérletet 2:1 arányú 0-szitoszterin és kampeszterin eleggyel, sztigmaszterinnel, koleszt-4-én-3-onnal és koleszta-l,4-dién-3-onnal is megismételjük, valamint zsír és magliszt nélkül is. 15 VI. táblázat Kísérlet Szubsztrát Zsír és olajos magliszt Koncentráció s% ADD kitermelése, mg Maradék szubsztrát mg 1. koleszterin adalék nélkül 0 3 53 2. koleszterin lenolaj 1,0 26 0 3. koleszterin lenmagliszt 2,0 18 0 4. koleszterin lenolaj ♦ lenmagliszt 1,0+ 2,0 55 0 5. koleszterin szezámolaj 1,0 29 0 6. koleszterin szezámliszt 2,0 20 0 7. koleszterin szezámolaj + szezámliszt 1,0+ 2,0 52 0 8. szitoszterin-kampeszterin (2:1) adalék nélkül 0 2 70 9 szitoszterin-kampeszterin (2:1) lenolaj 1,0 10 40 10 szitoszterin-kampeszterin (2:1) lenmagliszt 2,0 7 58 11. szitoszterin-kampeszterin (2:1) lenolaj + lenmagliszt 1,0+ 2,0 20 22 12. sztigmaszterin adalék nélkül 0 1 86 13. sztigmaszterin lenolaj 1,0 4 50 14. sztigmaszterin lenmagliszt 2,0 4 50 15. sztigmaszterin lenolaj + lenmagliszt 1,0+ 2,0 9 38 In. koleszt-4-én-3-on adalék nélkül 0 5 18 17. koleszt-4-én-j-on lenolaj 1,0 23 4 18. koleszt-4-én-3-on lenolaj + lenmagliszt 1,0+ 2,0 55 0 19. koleszta-1,4-dién-3-on adalék nélkül 0 5 13 20. koleszta-1 ,-+-dién-3-on lenolaj 1,0 22 0 71. koleszta-1.4-dién-3-on lenolaj ♦ lenmagliszt 1,0 + 2,0 53 0 9. pclda A 8. pclda szerint járunk el a következő módosításokkal: ( 1 ) szubsztrátként 200 mg koleszterint használunk; : 2) a s/ójababolajat és szójabablisztet a VII. táblá- 60 ■■arban megadott mennyiségben adjuk hozzá; ■■> * s/ójabablis/.t alkalmazása felett 7,8 mg díivudil ulalékoi alkalmazunk. ••'évűi:-nyéket a VII. táblázatban foglaljuk Kísér-Szójababolaj Szójababliszt ADD kitermelés let s% s% mg í. 0 0 ' 3 2. 0 2,5 15 3. 0,15 2,5 15 4. 0,25 1,5 13 5. 0,25 2,5 16 6. 0,30 2,5 29 7. 0,50 2,5 41 8. 0,50 5,0 48 55 65
