173366. lajstromszámú szabadalom • Eljárás szteroidok mikrobiológiai oxidálására
11 173366 12 28 óra múlva 1,0 mg 1,10-fenantrolint adunk hozzá. Az inkubációt további 70 óra hosszat folytatjuk, majd a termékeket etilacetáttal extraháljuk és az 1. példában leírt módon elválasztjuk. Az ADD kitermelését a II. táblázatban adjuk meg. II. táblázat Kísérlet Zsír Koncentráció, s% ADD kitermelés, mg í. adalék nélkül 0 12 2. szójababolaj 0,15 15 3. szójababolaj 0,3 20 4. szójababolaj 0,5 37 5. szójababolaj 1,0 39 6. szójababolaj 2,0 41 7. szójababolaj 3,0 25 8. szőjababolaj 4,0 15 9. szójalecitin 1,0 38 10. szójalecitin 2,0 . 38 11. szójalecitin 3,0 30 12. szójalecitin 4,0 18 13. földimogyoróolaj 2,0 40 14. szezámolaj 2,0 30 15. olívaolaj 2,0 32 16. kukoricaolaj 2,0 33 17. repceolaj 2,0 38 18. rizskorpaolaj 2,0 35 19. pálmaolaj 2,0 35 20. kókuszdióolaj 2,0 36 21. gyapotmagolaj 2,0 40 22. nyers szójababolaj 2,0 32 23. szalonna 2,0 29 24. cetolaj 2,0 32 25. ricinusolaj 2,0 38 26. szójababolaj + ricinusolaj 2,0 + 0,3 43 3. példa A 2. példa szerint járunk el, de 1,10-fenantrolin helyett 3,0 mg 8-hidroxikinolint használunk és a zsírok helyett a III. táblázatban megadott mennyiségű glicerideket alkalmazzuk. Az inkubációt a 8-hidroxikinolin hozzáadása után 28 órával megszakítjuk, azaz 56 órával az inkubáció kezdete után. Ha az inkubációt ebben a korábbi szakaszban szakítjuk meg, akkor az ADD mellett DHT is keletkezik. A fermentlevet az 1. példa szerint dolgozzuk fel. Az eredményeket a III. táblázatban foglaljuk össze. Kísérlet- Glicerid Koncentráció, s% Kitermelés ADD DHT mg mg í. adalék nélkül 0 14 2 2. trisztearin 0,5 19 14 3. trisztearin 1,0 25 18 4. trisztearin 1,5 27 16 5. trisztearin 2,0 23 16 ó. trisztearin 3,0 19 16 7. trisztearin 4,0 15 5 8. triolein 1,5 21 25 9. a-monosztearin 1,5 27 18 10. a,a’,-diszteann 1,5 20 14 11. tripalmitin 1,5 26 16 Az 1. ábrán az inkubációs idő és a koleszterin és a keletkezett oxidációs termékek közötti összefüggést tüntettük fel az előző példa 4. kísérlet alapján. 4. példa A következő összetételű oltóközeget állítjuk elő: 2.0 % n-paraffm (főleg Ci 4 paraffin), 0,5 % ammóniumszulfát, 0,25% dikáliumhidrogénfoszfát, 0,1 % kristályos magnéziumszulfát, 0,5 % kukoricalekvár és a többi víz. Az oltóközeg pH-értékét nátriumhidroxid-oldattal 7,5-re állítjuk. 100 ml oltóközeget 500 ml-es rázólombikban helyezünk és a lombikot 15 percig 120°-on sterilizáljuk, majd lehűtjük. A táptalajt beoltjuk Nocardia erythropolis (ATCC 4277) mikroorganizmussal és 35 óra hosszat 30°-on az 1. példa szerinti rázógépen inkubáljuk. A következő összetételű főfermentációs táptalajt állítjuk elő: 1.0 % szőlőcukor, 0,5 % élesztőkivonat, 0,5 % malátakivonat, 0,5 % húskivonat, 0,1 % dikáliumhidrogénfoszfát, 0. 02% kristályos magnéziumszulfát, 1.0 % repceolaj. A közeg pH-értékét nátriumhidroxid-oldattal 7,0-re állítjuk. 50 ml főfermentációs táptalajt 500 ml-es rázólombikba helyezünk. A lombikot 20 percig 120°-on sterilizáljuk, majd lehűtjük. A lombikot beoltjuk 2 ml fenti oltótenyészettel és 30°-on az 1. példa szerint rázógépen inkubáljuk. A főfermentáció megkezdése után 20 órával 150 mg koleszterint adunk a táptalajhoz, majd a fermentáció kezdetétől számított 28 óra múlva 4,7 g 2,2’-dipiridilt adunk hozzá. A 2,2’-dipiridil hozzáadásától számított 70 óra múlva az inkubációt megszakítjuk és a fermentlét az 1. példa szerint feldolgozzuk. Kitermelés 12 mg ADD. A fentiek szerint eljárva, de repceolaj hozzáadása nélkül 8 mg ADD-t kapunk. 5. példa A következő összetételű oltóközeget állítjuk elő: 1,0% szőlőcukor, 0,3% húskivonat, 1,0% pepton, 0,5% nátriumklorid és a többi víz. Az oltóközeg pH-értékét nátriumhidroxid-oldattal 7,2-re állítjuk be. 100 ml oltóközeget 500 ml-es rázólombikba helyezünk, és a lombikot 20 percig 120°-on sterilizáljuk, majd lehűtjük. Ezután beoltjuk Mycobacterium phlei (IFO 3158) mikroorganizmussal és 70 óra hosszat 35°-on az 1. példa szerint rázógépen inkubáljuk. A következő összetételű főfermentációs táptalajt állítjuk elő: 2,0% kukoricalekvár, 2,0% szőlőcukor, 0,4% nátriumglutamát, 0,2% aszparagin, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6
