173101. lajstromszámú szabadalom • Eljárás enzimtartalmú mikroorganizmus sejtek rögzítésére
7 173101 8 mg ammóniumperszulfátot adunk hozzá. 2 óra múlva további 150 mg mennyiségű ammóniumperszulfátot adunk a reakcióéi egyhez, és további 1 órán át folytatjuk a keverést. Azonos térfogatú vizet adunk az elegyhez, majd centrifugáljuk. A nedves maradékot szüljük és vízzel mossuk, amiután 32,25 g, az eredeti 5 gliikóz-oxidáz aktivitás 78 %-át tartalmazó nedves, rögzített sejtekből álló terméket kapunk. 100 ml, 10 g $ükózt tartalmazó vízhez 47,3 g az 1. példában megadott eljárással előállított nedves, rögzített sejtekből álló készítményt adunk, majd 21 órán át, levegőztetés, közben, szobahőmérsékleten keverjük a szuszpenziót. A glükóz 99 %-ban glukon- 15 savvá és delta-glukonolakt ónná alakul miután az eredeti enzimaktivitás 75 %-át visszakapjuk. Az oxidációt 30 g, a 2. pádában megadott eljárással előállított és 20 ml, 2 g glükózt tartalmazó __ vízben szuszpendált nedves, rögzített sejteket tártál- í mázó készítménnyel megismételjük, amikor az átalakítás és az enzimaktivitás visszanyerése a fentiekhez hasonló mértékű. 4. példa ^ Süllyesztett, levegőztetett fermentációs körülmények között, 28 C° hőmérsékleten tejkazeint tartalmazó, 6,8-7,0 pH-jú táptalajon Proteus rettgeri -n (ATCC 9250; Pfizet Culture FD 18470-76-60) mikroorganizmust tenyésztünk, majd centrifugáljuk a tenyészetet. A sejteket vízben szuszpendáljuk, és félszáraz pasztát készítünk belőle. 100 ml vízben szuszpendáljuk a nedves sejteket (7,5 g szárazsúly) és 4 g 25 súlyszázalékos vizes glutáraldehidet adunk a szuszpen- 35 zióhoz. Három órán át 7,0 pH-n keverjük a szuszpenziót, majd centrifugáljuk. 100 ml vízben szuszpendáljuk a kezelt sejteket, majd keverés közben 7,5 g, az 1. példában megadottak szerint előállított glicidil-metakrilát polimert adunk a szuszpenzióhoz. 7,0 pH-n, 30 órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd szűréssel elkülönítjük a szilárd halmazállapotú terméket, vízzel mossuk és nedves pogácsaként tároljuk felhasználásig. 45 A rögzített sejtek a penicillin G 6-aminopenicillánsawá alakulásán alapuló mérés szerint az eredeti, nem kezelt sejtek enzimaktivitásának 65 %-át tartalmazzák. , 50 5. példa 500 ml 8,0 pH-iú és 37 C° hőmérsékletű vizhez 20 g (5,0 g szárazsúly), a 4. példában megidott eljárással előállított rögzített Proteus rettgeri sejteket adunk, 55 majd 5 g kálium-penicillin G-t adunk a szuszpenzióhoz. 1 n nátrium- hidroxid ellenőrzött adagolásával 8,0-on tartjuk a szuszpenzió pH-ját, amikor 3 óra múlva a hidrolízis teljes. Szűrjük a rögzített sejteket, vízzel mossuk őket, és nedves pogácsaként tároljuk a go további felhasználásig. 2 n hidrogénkloriddal 2 -re állítjuk be a szürlet pH-ját és etilacetáttal extraháljuk. 2 n nátriumhidroxid oldattal 4,3-ra állítju be a vizes fázis pHját, töményítjük és lehűtjük, amikor fehér színű, kristá- 55 lyos terméket kapunk. Szűréssel elkülönítjük a kristályokat, vízzel mossuk és levegőn szárítjuk őket, 4 amikor 2,17 g (75 %-os kitermelés) tiszta 6-aminopenicillánsavat kapunk. 20 hidrolitikus lépés után a 4. példa szerinti eljárássá előállított eredeti rögzített sejtek aktivitásának még 50 %-a mérhető. 6. példa 15 ml vízhez 3,6 g brómacetil-hidroxietil-metakrilátot adunk és nitrogénatmoszféra alatt, keverés közben 375 mg N ,N’-metilén-bisz-akrilamidot adunk az elegyhez. 5 C° hőmérsékletre hűtjük el gyet, és 0,25 ml dimetü-amino-propionitrilt és 38 mg ammóniumperszulfátot adunk hozzá. Szobahőmérsékleten, lassú ütemben, addig keverjük, míg megindul a polimerizáció. Ezután megállítjuk a keverőt, és 2 órán át szobahőmérsékleten hagyjuk állni a szuszpenziót. 25 ml vizzel hígítjuk a kapott szuszpenziót, majd szűrjük; vízzel mossuk a szűrési maradékot, és levegőn szárítjuk, amikor 3,7 g szemcsés polimerizátumot kapunk. 10 g nedves (szárazsúly; 2 g) a 4 példában megadott eljárással tenyésztett és elkülönített Proteus rettgeri sejtpasztát 50 ml, 0,8 g 25 súlyszázalékos gjutáraldehidet tartalmazó vizhez adunk. 7,0-re állítjuk be a szuszpenzió pH-ját, majd 3 órán át szobahőmérsékleten keverjük, végül centrifugáljuk. 50 ml vízben szuszpendáljuk a kezelt sejteket, majd félszáraz pasztát készítünk. 120 ml vízben 10 g kezelt sejtet és 20 g brómacetil-hidroxietil-metakrilát polimert szuszpendálunk, majd 30 órán át szobahőmérsékleten, 7,0 pH-n keverjük a szuszpenziót. Ezután szűrjük, a szűrési maradékot vízzel mossuk, amikor 36,8 g nedves, rögzített sejteket és az eredeti, nem kezelt sejtek penicillin-aciláz aktivitásának 75 %-át tartalmazó készítményt kapunk. 7. példa 500 ml 8,0 pH-jú, 37 C° hőmérsékletű vízben 46 g, a 6. példában megadott eljárással előállított rögzített sejteket tartalmazó készítményt szuszpendálunk, majd 5 g kálium-penicillin G-t adunk a szuszpenzió pH-ját, amikor 3 óra alatt a hidrolízis teljessé válik. Szűréssel elkülönítjük a rögzített sejteket, vízzel mossuk, és nedves pasztaként további felhasználásig tároljuk őket. 2 n hidrogénkloriddal 2-re állítjuk be a szűrlet pH-ját, és etilacetáttal extraháljuk. 2 n nátríumhidroxid oldattal 4,3-ra állítjuk be a vizes fázis pH-ját. töményítjük és hütjük, amikor kristályos 6-aminopenicillánsavat kapunk. 8. példa 60 ml vízben 25 g, az 1. pádában megadott eljárással előállított Aspergillus niger sejtpasztát és 2 g glicidil- metakrilátot szuszpendálunk, majd 17 órán át 7 C° hőmérsékleten keverjük a szuszpenziót. Ezután 40 ml, 6,8 pH-jú, 2,2 g NJN’-metilén-bisz-akrilamidot, 2 ml sztirolt, 450 mg metü-metakrilátot, 0,5 ml dimetilamino- propionilt és 1,5 g f2-hidroxi-3-(l-[4-metilpiperazinil])-propil]- metakrilátot tartalmazó vizhez adjuk az elegyet. Nitrogén-atmoszféra alatt 200 mg ammóniumperszulfátot adunk a reakcióelegyhez, majd 3 órán át szobahőmérsékleten keverjük.
