172960. lajstromszámú szabadalom • Eljárás Streptomyces fradiae törzsek pronáz termelésének fokozására és pronáz fermentációjára
9 172960 10- gentamicin kezelésnek vetettük alá a 4. példában leírt módszerrel azonos körülmények között. A túlélőkből 100 db telepet izoláltunk. Az izolált telepek termelőképességének eloszlását PF-jelű táptalajon végzett fermentációval vizsgáltuk. Magas pronáz termelőképességet a következő jelzésű törzsek mutattak: PG-04712, PG-04733, PG-04745 és PG—04751. Ezeknek a Streptomyces fradiae törzseknek Czapek-Dox agaron kifejlesztett spórás tenyészetéből az 5. példában leírt módon „fagyasztott oltóanyagot” készítettünk. Az így kapott négy fagyasztott oltóanyag felhasználásával ugyancsak az 5. példában leírt módon üvegfermentoros fermentációkat végeztünk. Kísérleti kontrollként ebben az esetben a PG-02702 (OKI-00145/75) jelű törzs fagyasztott oltóanyagát használtuk. Eredményeinket az 5/a és 6/a táblázatokban foglaltuk össze. A táblázatokból a következők állapíthatók meg: A négy kiválasztott törzs 350 PUK/ml-nél magasabb termelőképességű. Az ismételt kezelés hatására - az izolált törzsek között — tovább szűkültek az alacsony és magasabb termelőképességű törzsek szélső határai. A termelőképesség szélső határain belül további eltolódás figyelhető meg a magasabb termelőképesség irányába, bár a csúcsértékek már nem változnak számottevően, ív ö. az 1., 3., 4., 5., és 6. táblázatok adataival.) 9. példa Az Actinomyces (Streptomyces) fradiae USSR RIA—571 jelű törzs (deponálva: ATCC 15861 szám alatt) spóraszuszpenzióját (spóraszám 4,2 * 108/ml) MNG kezeiesnek vetettük alá, majd a háromszor 1. sz. mosott spóraszuszpenziót a kezelés előtti téri hígítottuk steril fiziológiás konyhasóoldattal, „ a spóraszuszpenziót szélesztettük a 3. példa szerint pH = 7,5 értékű Czapek-Dox táptalajra, amelynek 5 gentamicin koncentrációja a táptalaj milliliterenként 6 egység volt. Az izolált telépek pronáz termelőképességének eloszlását PF jelű táptalajon végzett fermentációval vizsgáltuk. A kezelt és izolált törzsek kb. 40—50%-ánál számottevő mértékben 10 (50-80%-ban) tapasztaltuk a pronáz termelés emelkedését a kezeletlen kiindulási RIA-571 jelű szülő törzshöz viszonyítva. 15 10. példa A 9. példa szerint eljárva, de kiindulási törzs- 20 ként a Streptomyces fradiae IMRU—3739 jelzésű törzsét használva (deponálva: ATCC 14544 szám alatt), a kezelt és izolált törzsek kb. 45-55%-ánál számottevő mértékben (50-80%-ban) tapasztaltuk a pronáz termelés emelkedését a kezeletlen kiindu- 25 lási IMRU-3739 jelű szülő törzshöz viszonyítva. 11. példa 30 A 9. példa szerint eljárva, de kiindulási törzsként a Streptomyces fradiae ETH-13472 jelzésű törzsét használva (deponálva: ATCC 10745 szám alatt), a kezelt és izolált törzsek kb. 45-55%-ánál 35 számottevő mértékben (50-80%-ban) tapasztaltuk a pronáz termelés emelkedését a kezeletlen kiindulási ETH-13472 jelű szülő törzshöz viszonyítva. táblázat PRONÁZ termelőképesség PUK/ml 100 100-150 150-200 200-300 300-350 összes-------------------------------------------------------------------- - - szám egyedek % egyed ek % egyedek % egyedek % egyedek % száma száma száma száma száma Streptomvces 1 1 48 48 50 50 1 1 — — 100 fradiae P-102003 jelű törzsből természetes szelekcióval nyert törzsek termelőképességének megoszlása. MNG-vel kezelt - - 37 38,1 55 56,7 5 5,2 - - 97 mutánsok termelőképességének megoszlása 5
