172931. lajstromszámú szabadalom • Eljárás és reagens szubsztrátumok vagy enzimaktivitások meghatározására
MAGTAR NÉPKÖZTÁRSASÁG SZABADALMI LEÍRÁS 172931 0 Bejelentés napja:' 1977. V. 06. (BO-1667) Német Szövetségi Köztársaság-beli elsőbbsége: 1976. VI. 09. (P 26 25 834.4) Nemzetközi osztályozás: GOIN 33/16, 31/14 ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL Közzététel napja: 1978. VII. 28. Megjelent: 1979. VII. 31. Feltalálók: Danninger Josef vegyésztechnikus, Gräfelfing, dr. Deneke Ulfert gyógyszerész, Peissenberg, Lang Gunter vegyésztechnikus, dr. Michal Gerhard vegyész, Tutzing, dr. Röschlau Peter vegyész, Seeshaupt, Német Szövetségi Köztársaság Tulajdonos: Boehringer Mannheim GmbH., Mannheim-Waldhof, Német Szövetségi Köztársaság Eljárás és reagens szubsztrátumok vagy enzimaktivitások meghatározására 1 A találmány tárgya eljárás és reagens szubsztrátumok vagy enzimaktivitások meghatározására, mérési reakcióként redox-reakciót alkalmazva. Az enzim-, illetve szubsztrátum-koncentrációk meghatározására szolgáló redox-reakciók a klinikai 5 és gyógyszerészeti kémiában, a biokémiában, valamint az élelmiszerkémiában igen fontosak. Ezek a reakciók fotometriás mérésekkel értékelhetők ki. Amennyiben a vizsgált rendszerben az érdekelt redox-partnereken kívül még további redukáló 10 anyagok is vannak, úgy zavarokkal kell számolni. Különösen gyakran található a vizsgált anyagban aszkorbinsav. Ez, mint erős redukálószer, zavarokhoz vezet, ha olyan gyógyszereket vagy fiziológiai folyadékokat, így szérumot vagy urinát, aszkorbin- 15 sav-tartalmú növényi nedveket vagy egyéb élelmiszereket vizsgálnak, amelyek aszkorbinsavat tartalmaznak, vagy amelyekhez ezt hozzáadták. így például ismeretes, hogy az aszkorbinsav a következő reakciókat zavarja: 20 A az olyan reakciókat, amelyeknél hidrogénperoxidot és egy hidrogéndonátort peroxidázzal (POD) reagáltatnak, zavarja az aszkorbinsav + H2 02 £2S- dehidroaszkorbinsav + H20 reakció. 25 BAz olyan reakciókat, amelyeknél tetrazóliumsókat redukálószerekkel formazánokká redukálnak, zavarja az aszkorbinsav + tetrazóliumsó------►formazán + + dehidroaszkorbinsav reakció. 30 2 C Az olyan reakciókat, amelyeknél fenolokat nukleofil reagensekkel oxidative kapcsolnak, az zavarja, hogy az aszkorbinsav jelenléte eddig még nem tisztázott módon mellékreakciókhoz vezet és így nem egységes összetételű kapcsolási termékek keletkeznek, amelyek abszorpciós viselkedése normál és ultraibolya fényben a normál módon képződött kapcsolási termékekétől eltér. A nukleofil reagensekkel oxidative kapcsolható fenolok azok, amelyek kis elektronsűrűségű szénatomot tartalmaznak. Ide tartoznak a helyettesített egy- vagy többgyűrűs fenolok, amelyek szabad ovagy p-helyzettel rendelkeznek. A példákban említett fenol, brenzkatechin (pirokatechin), 2,4-diklór-fenol és gvajak-gyantán kívül ide tartoznak például az O-, m-, p-difenolok, o-, m-, p-helyettesített fenolok, amelyek metil-, amino-, nitro-, szulfo-, karboxil- vagy metoxicsoporttal, vagy halogénatommal helyettesítettek. A nukleofil helyettesítők primer vagy szekunder aminok, alkoholok, tiolok, hidrazonok vagy hidrazinok lehetnek. Az aszkorbin savnak a vizsgált anyagból való eltávolítására a szokásos oxidációs módszerek általában nem alkalmasak, mivel az oxidálószerek megtámadják és elbontják a szubsztrátumokat és az enzimeket is. Ezek reakciótermékei, többnyire kétvagy háromvegyértékű fémionok, gyakran gátolják az indikátorreakcióhoz alkalmazott enzimeket. Az aszkorbinsavnak oxigénnel való elbontása erősen 172931
