172872. lajstromszámú szabadalom • Eljárás peroxidáz enzim előállításra
A találmány szerinti eljárást az alábbi példákkal tatlan részeket szűréssel elválasztjuk. A tiszta oldaszemléltetjük. tot az 1. példa szerinti módon Akrilex P4 töltetű oszlopokon kromatografáljuk és liofilizáljuk. A végtermék súlya: 174 g,aktivitása: 1340 E/mg. 172872 1. példa s 1000 kg élelmiszeripari tormagyökér hulladékot 3 m2 3 vízzel extrahálunk. 5 napos ülepítés után a tiszta felülúszót ledekantáljuk a növényi részekről. Az így kapott oldatból ammónium-szulfáttal tör- 10 ténő 70%-ra telítéssel kicsapjuk a nyers peroxidázt. Négy napos ülepítés után az inaktív felülúszót ledekantáljuk. A kb. 600 liter csapadékos részt dobcentriftigán tömörítjük. A csapadékot vízben oldjuk, ügyelve arra, hogy a fehéijekoncentráció 15 70-80 mg/ml legyen. Az oldatból 50—70% közötti telítési tartományban ammónium-szulfáttal kicsapjuk a peroxidázt. A centrifugán elválasztott aktív csapadékot desztillált 20 vízben 17%-os szárazanyagtartalmúra oldjuk és Akrilex P4 töltetű oszlopokon desztillált víz eluenst alkalmazva kromatografáljuk. Oszlop- 25 jellemzők: töltet magasság : 120 cm belső átmérő : 6 cm felvitt enzimoldat : 350 ml átfolyási sebesség : 1,5 l/ó 30 Az aktív, sómentes frakciókat liofilizáljuk. A végtermék súlya: 162 g, aktivitása: 1180 E/mg. Hasonló mennyiségű nyersanyagból kiindulva a 165 727 lajstromszámú magyar szabadalom szerint: 35 423 g, 248 E/mg-os aktivitású terméket nyertek. 2. példa 40 3000 kg tormagyökeret csigás présen kipréselünk. A szilárd maradékot tormaillóolaj gyártásra használjuk. A kinyert 900 liter préslevet ammónium-szulfáttal 70%-ra letelítjük. Egy hetes ülepítés után a felülúszót ledekantáljuk. A maradékot cent- 45 rifugán tömörítjük. A csapadékot 400 liter desztillált vízben beoldjuk. Az oldatból 50-70% közötti telítési tartományban kicsapjuk a peroxidáz tartalmú frakciót. A centrifugán elkülönített csapadékot 6 liter desztillált vízben feloldjuk, az oldha- 50 3. példa 3000 liter élelmiszeripari tormafehérítőlevet egy héten át ülepítünk. A felülúszót ledekantáljuk- a kiülepedett növényi maradékról. Ezután 80%-ra történő telítéssel ammónium-szulfátos kicsapást hajtunk végre. A centrifugálással elkülönített csapadékot 600 liter vízben beoldjuk, 50-70% közötti telítési tartományban ammónium-szulfáttal frakcionáljuk. A peroxidázt tartalmazó csapadékot centrifugán elválasztjuk. A csapadékot leméijük és hatszoros mennyiségű desztillált vízben oldjuk. Sephadex G10 töltetű oszlopokon desztillált víz eluenssel kromatografáljuk. Az oszlopozás az 1. példában leírtak szerint történik. Az oszlopokról lejövő sómentes, peroxidázt tartalmazó frakciókat liofilizáljuk. A végtermék súlya. 141 g, aktivitása: 1412 E/mg. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás peroxidáz enzim előállítására tormagyökér vizes extraktumából, különösen tormafehérítőléből, tormahántalék extraktumából vagy tormaprésléből az ülepített extraktum ammónium-szulfátos kisózásával kapott fehéijefrakció feldolgozásával, azzal jellemezve, hogy az ülepített extraktum felülúszójából ammónium-szulfátos kisózással az 50 és lWo-o% telítési értékek között kicsapódó fehéijefrakciót elválasztjuk, a kapott csapadékot 3—20-szoros, előnyösen 5—7-szeres mennyiségű desztillált vízben oldjuk, az oldatot 6000-es kizárási molekulasúlynál kisebb pórusméretű géllel töltött oszlopra felvisszük, a peroxidáz enzimet az oszlopról desztillált vízzel eluáljuk és a tisztított enzimoldatot önmagában ismert módon liofilizáljuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítás! módja, azzal jellemezve, hogy a peroxidáztartalmú enzimoldatot dextrán típusú gélen tisztítjuk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a peroxidáztartalmú enzimoldatot poliakrilamid típusú gélen tisztítjuk. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 794065 - Zrínyi Nyomda
