172666. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új mikrobiális proteázok előállítására
MAGYAR nRpkOztarsaság SZABADALMI LEÍRÁS 172666 JËÈSk Nemzetközi osztályozás: Bejelentés napja: 1975. II. 13. (11-210) C 12 D 13/10 Német Demokratikus Köztársaság-beli elsőbbsége: 1974.11.15. (WPC 12 d 176 206) ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL Közzététel napja: 1978. V. 27. Megjelent: 1979. III. 31. ' ’*• - < i V í * ■ Feltalálók: dr. Leuchtenberger Andreas okL biológus, dr. Zickler Fritz old. biológus, Klingenberg Peter okL biológus, Potsdam, dr. Taeufel Alfred oki. élelmiszervegyész, prof. dr. Ruttloff Heinz oki. élelmiszervegyész, Bergholz-Rehbrücke, dr. Kupke Günter oki. biológus, Jéna, Meisel Peter okL vegyész, Greifswald, Német Demokratikus Köztársaság Tulajdonos: Institut für Enzymologie und Technische Mikrobiologie, Berlin, Német Demokratikus Köztársaság Eljárás új mikrobiális proteázok előállítására 1 A találmány tárgya eljárás hőstabil proteáz készítményeknek a Thermoactinomyces vulgaris mikroorganizmus IMET 9515 számon deponált törzse és mutánsa felhasználásával történő kinyerésére. A Thermoactinomyces vulgaris mikroorganizmusok az 5 állati- és növényi eredetű proteinek parciális hidrolíziséhez illetve azok oldhatóvá tételéhez speciális tulajdonságokkal rendelkeznek. Ismeretes - lásd például 2 239 650 számú Német Szövetségi Köztársaság-beli nyilvánosságra 10 hozatali irat, 3 827 939 és 3 674 644 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás — hogy számos mikroorganizmus, például a Streptomyces és Pénicillium nemzetségek alkalmas tenyésztési körülmények mellett proteázokat termel- 15 nek, melyek tulajdonságukat tekintve egymástól különböznek. A 3 827 939 számú Amerikai Egyesük Alhmok-beli szabadalmi leírásnak megfelelő eljárással termelt proteáz 5,0-13,0 pH-tartományban fejti ki hatását. 6,9-es pH-értéknél, 50C°-on 20 csaknem 60 percen át stabil, ugyanis stabilitása erősen nő a hőmérséklet emelésével. Különböző alkalmazást célokra előnyös, ha az aktivitás 5 és 20 C° között igen csekély, míg 70 C°-nál magasabb hőmérsékleten teljes mértékű. 25 A 2 015 504 és 1 517 787 számú Német Szövetségi Köztársaság-beli nyilvánosságra hozatali iratokban javaslat történik arra, hogy az enzimek hőmérsácleti viselkedését stabilizátorok, például Ca2+, szőrbit, szacharóz vagy más szénhidrátok hozzáadásával 30 2 megváltoztassák. Kielégítő eredményt azonban nem sikerűit ezzel az eljárással elérni. Az utóbbi időben különösen jelentőségre tesznek szert a termofil mikroorganizmusokból, így például a Thermopolyspora polyspora-ból származó proteázok, mint ez például a 3 713 983 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalomban ismertetésre kerül. A termofil mikroorganizmusok alkalmazását eddig azonban gátolta az a tény, hogy a proteázhozam, melyet azonos, de mezofil mikroorganizmusokon keresztül mértek, viszonylag csekély. Megállapították továbbá, hogy normális esetben a Thermoactinomyces vulgaris tenyész-szűrletében levő enzimelegy hőmérsékletoptimuma ingadozhat. A Thermoactinomyces vulgaris három proteoletikusan aktív komponenst termel, amelyekből csupán egy tekinthető 70 C° feletti hőmérsékletoptimummal hőállónak. (J. of Bacteriol. 1969. 100, 149-155) A találmány célja a Thermoactinomyces vulgáris IMET 9515 számon deponált törzse és mutánsa tenyésztésén keresztül meghatározott hőálló proteáz kinyerése, melynek enzimaktivitása a növényi proteázoknak megfelelő fajlagos bontóképességgel rendelkezik, hőállósága azonban felülmúlja a növényi proteázok hőállóságát. A találmány feladata tehát alkalmas tápközeg megválasztásával nagy hozamban hőálló proteázok kinyerésére. 172666
