172618. lajstromszámú szabadalom • Eljárás koleszterinoxidázt termelő mikroorganizmusok enzimtermelésének növelésére
7 172618 8 iége körülbelül 1,5 g/liter lesz, ami 1 :20 hígitású tápfolyadéknál £ = 0,250 értékű zavarosságnak felel meg. A fenti koncentráció elérése után sterilezett koleszterinszuszpenziót adunk hozzá folyamatosan 5 a további tenyésztés alatt, oly módon, hogy 20 órás tenyésztési időn belül összesen 30 g koleszterint viszünk be a fermentorba. A koleszterin-szuszpenzió 0,1—0,2% élesztőkivonatot tartalmaz. A tenyészet semlegesítésére ecetsav helyett most már 10 hígított sósavat használunk. A tenyésztést befejezve a biomasszát centrifugálással választjuk el a tápoldattól és 2,6 g/liter szárazanyagot kapunk, melynek aktivitása 12 E/g szárazanyag. 5. példa Kétlépcsős folyamatos tenyésztési eljárásnál a két fermentort — melyek közül az első fokozat 20 15 liter, a második pedig 70 liter munkatérfogatú - úgy kombináljuk, hogy az 1. példában leírt táptalaj 4 literének óránkénti átfolyásánál az első fokozatban 0,25-0,30, a másodikban pedig 0,055-0,065 térfogat/óra az átfolyási sebessé- A 25 tenyésztés elkezdésekor a második fokozatot 1,5 liter, az első fokozatot pedig 0,5 liter jól fejlett Nocardia erythropolis (ATCC 17 895) előtenyészet - tel oltjuk be (egymás után 5 órás eltolódással). A két fokozat 10 liter/1/perc levegőztetése mellett a 30 4. példában leírt növekedési kritériumok elérésig folytatjuk a tenyésztést, miközben az első fokozatot ecetsavval és a másodikat sósavval semlegesítjük. Egyidejűleg a második fokozathoz - a 4. pél- 35 dának megfelelően — folyamatosan koleszterin-emulziót adunk (ugyancsak a 4. példában leírt módon) és megindítjuk az óránkénti 4 liter hozzáfolyatást. A pH-t 7—7,5 értéken tartjuk. így óránként 4 liter tápfolyadékot nyerünk ki 7 g/liter száraz- 40 anyag-tartalommal, melynek aktivitása 30 E/g szárazanyag. A tápoldatot hűthető tárolótartályban gyűjtjük össze, és időről időre a baktériumtömeget belőle folyamatos működésű centrifugán leválasztjuk. A pH-érték szabályozására az első fokozatban 45 óránként 10 g 100%-os ecetsav szükséges. 9. példa 50 A 3. példában leírtak szerint járunk el, mikroorganizmusként Arthrobacter simplex NCIB 8929 törzset alkalmazva. 65,0 ml baktérium-masszát kapunk (kb. 10,0 g szárazanyag), melyet a 6. példában leírt módon feltárunk, extrahálunk és tisztítunk. Az így kapott koleszterinoxidáz fajlagos aktivitása 28,0—32,0 E/mg protein. 10. példa A 3. példában leírtak szerint járunk el, mikroorganizmusként Brevibacterium steroliticum ATCC 21 387 törzset alkalmazva. 50,0 ml baktérium-masszát kapunk (kb. 7,0 g szárazanyag), melyet a 6. példában leírt módon feltárunk, extrahálunk és tisztítunk. Az így kapott koleszterinoxidáz fajlagos aktivitása 21,0—23,0 E/mg protein. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás koleszterinoxidázt termelő mikroorganizmusok, előnyösen Nocardia erythropolis NCIB 9158, 17 895, 4277 és Nocardia formica ATCC 14 811 törzsek koleszterinoxidáz termelésének fokozására, azzal jellemezve, hogy a mikroorganizmust szénforrásként peptont vagy acetátot tartalmazó ásványisó-táptalajon tenyésztjük, majd vizes koleszterin-szuszpenzióból nedves őrléssel és hősterilezéssel előállított koleszterin-emulziót adunk hozzá, mihelyt a mikroorganizmus eléri a logaritmikus növekedés szakaszát, és ezután koleszterinen mint egyedüli szénforráson tenyésztjük tovább. (Elsőbbsége: 1973. február 15.) 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy az indukciós eljárás során a tenyészethez literenként 1—20 g koleszterint adunk. (Elsőbbsége: 1972. május 17.) 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy a mikroorganizmust a gyorsuló növekedés szakaszából a logaritmikus növekedés szakaszába való átmenetig acetáton, mint egyetlen szénforráson tenyésztjük tovább. (Elsőbbsége: 1973. február 15.) 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy élesztőkivonattal stabilizált koleszterin-emulziót használunk. (Elsőbbsége: 1973. február 15.) 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a mikroorganizmust folyamatosan két sorbakötött tartályban tenyésztjük, mime llett a második fokozatban a mikroorganizmus átlagos tartózkodási ideje 4—8-szorosa az első fokozatban való átlagos tartózkodási időnek, és a koleszterin-emulziót a tápfolyadékhoz a második fokozatban adjuk. (Elsőbbsége: 1973. február 15.) A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 794028 - Zrínyi Nyomda 4
