172505. lajstromszámú szabadalom • Kísérleti eszköz és módszer vérben hemoglobin meghatározására
9 172505 10 3. oldat: diatómaföld szalicilsav cellulóz-acetát diklóretán aceton 16,5 g 0,165 g 1,65 g 60 ml 50 ml 0,01 cm vastag filmszubsztrátra az 1. oldatból olyan mennyiséget viszünk fel, hogy azon 10 0,025 cm vastag réteg alakuljon ki. Az első réteget ezután levegőn megszárítjuk, mielőtt újabb rétegeket vinnénk fel. Az első rétegre ezután a 2. oldatból olyan mennyiséget viszünk fel, hogy szárítás után e második réteg vastagsága 0,025 cm legyen. 15 A 3. oldatból is olyan mennyiséget viszünk fel, hogy szárítás után a kialakult harmadik réteg vastagsága 0,025 cm legyen. Az így kapott többrétegű eszközt ezután 0,51 cm x 1,02 cm nagyságú darabokra vágjuk. 20 100ml-ként 8,9 g és 15,9 g közötti ismert mennyiségű hemoglobint tartalmazó vérmintákból ezután mintegy 10-10 mikrolitert viszünk fel az eszközök felső felületére úgy, hogy azok vérrel 25 telítődjenek. A vérrel telített többrétegű eszközök felső rétegéről visszaverődő fényt ezután 620 nm-en gyors letapogató reflektancia-spektrofotométerrel mérjük, majd a kapott eredményeket lineáris regressziós analízisnek vetjük alá, amikor is korrelációs 30 koefficiensként 0,67-et kapunk 2,0 g% hemoglobin nagyságú visszamaradt standard eltéréssel. Ez 16,6%-os változási együtthatónak felel meg. így tehát a technika állása szerint ismert többrétegű eszköz sem alkalmas teljes vérben a hemoglobin 35 klinikai pontossággal való meghatározásához. 4. példa 40 Eltérő törésmutatójú fényvisszaverő anyagokkal készítünk a találmány értelmében analitikai eszközöket. Fényvisszaverő anyagként a kísérletek során közel 1,5-es törésmutatójú szilícium-dioxidot, közel 2,3-es törésmutatójú cink-szulfidot és közel 2,6-es 45 törésmutatójú titán-dioxidot használunk. Impregnáló-szárítón reagenspapírokat készítünk 0,5 mm/sec papírmozgatási sebesség és 60 C°-os szárítási hőmérséklet tartásával az Eaton-Dikeman cég 50 (Mount Holly Springs, Pennsylvania, Amerikai Egyesült Államok) által szállított, 204. típusú, közel 100 mm széles szűrőpapírból kiindulva. Impregnáló folyadékként Natrosol 250 MR márkanevű adalékanyagra [hidroxietil-cellulóz, gyártja a 55 Hercules Inc., (Wilmington, Delaware, Amerikai Egyesült Államok)] vonatkoztatva 0,05%-os, nátrium-lauril-szulfátra vonatkoztatva 0,05%-os és fényvisszaverő anyagra vonatkoztatva 10%-os, víz és toluol 1 : 1 arányú elegyével készült emulziót hasz- 60 nálunk. Fényvisszaverő anyagként közelebbről a DuPont cég által szállított titán-dioxidot, a Fisher cég által szállított cink-szulfidot és a J. T. Baker cég által szállított, közel 0,1 mm és 0,2 mm közötti lyukméretű szitákon áteső szemcseméretű 65 szilícium-dioxidot használunk. Elkészítünk összehasonlítási célokból egy olyan reagenspapírt is, amelynél nem használunk fényvisszaverő anyagot. A reagenspapírokból ezután az 1. példában ismertetett módon kísérleti eszközöket készítünk. Hemoglobint ismert koncentrációban tartalmazó vérmintákkal kapott kísérleti eredményeket az alábbiakban közlünk. Százalékos fényvisszaverőképesség 580 nanométernél Fényvisszaverő anyag 9,85% hemoglobin 16,75% hemoglobin-4,4 3,75 Si02 4,5 3,9 ZnS 7,5 6,1 Ti02 21,4 16,1 A szilícium-dioxid — amelynek törésmutatója közeli a véréhez — nem változtatja meg a kísérleti eszköz fényvisszaverőképességét. A vérétől eltérő törésmutatójú cink-szulfid és titán-dioxid ugyanakkor biztosítja, hogy a találmány szerinti kísérleti eszköz fényvisszaverőképessége a hemoglobin koncentrációjától függően változzék, és így a vérmintákban a hemoglobin kvantitatív mennyisége meghatározható legyen. 5. példa A 4. példában ismertetett módon reagenspapírt készítünk azzal a különbséggel, hogy fényvisszaverő anyagként a szűrőpapírra felvitt emulzióra vonatkoztatva 10% koncentrációban alumíniumport használunk. Az így kapott reagenspapírból az 1. példában ismertetett módon készített kísérleti eszközök fényvisszaverőképessége a vizsgált vérmintákban levő hemoglobin koncentrációjától függő, miként ezt az 1. példában ismertetett módon, de 300 nanométernél elvégzett fényvisszaverési kísérletek egyértelműen bizonyítják. A fény visszaverésben bekövetkező változás tehát elegendő a vizsgált mintában levő hemoglobin kvantitatív meghatározásához. Szabadalmi igénypontok: 1. Kísérleti eszköz vérmintában hemoglobin mennyiségének meghatározására 100 ml vérmintára vonatkoztatva ± 0,5 g hemoglobin pontossággal a visszavert fény 300 nanométer és 620 nanométer közötti hullámhosszon a vérmintának a kísérleti eszközzel való érintkeztetése után 0,5 perc és 3 perc közötti pillanatban végzett mérése útján, azzal jellemezve, hogy 1,0-nél kisebb vagy 1,7-nél nagyobb törésmutatójú, lényegében opak, fényvisszaverő és vért abszorbeálni képes mátrixa van, amely mátrix lényegében opak, fényvisszaverő 5
