172446. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 1-[L-(-)-gamma-amino-alfa-hidroxi-butiril]-kanamicin A előállítására
25 172446 26 zátor jelenlétében, atmoszféranyomáson, szobahőmérsékleten hidrogénezzük. Ezután a katalizátort eltávolítjuk, és vízzel mossuk. A szűrletet és a mosófolyadékokat egyesítjük, és a szerves oldószert vákuumban eltávolítjuk. Az így kapott vizes olda- 5 tot CG—50 (NH4+, 70 ml) gyantaoszlopra visszük, amelyet egymás után 0,4 liter vízzel, 0,5 liter 0,1 n ammóniumhidroxiddal, 0,5 liter 0,3 n ammóniumhidroxiddal, 1 liter 0,5 n ammóniumhidroxiddal és végül 0,5 liter 1 n ammóniumhidroxiddal eluálunk. 10 Az eluátumot 20 ml-es frakciókra bontjuk, és a frakciókat a vékonyrétegkromatogram (szilikagél lemez S—110, ninhidrin) szerint kapott Rf-értékek és a mikrobiológiai vizsgálatok alapján szétválasztjuk. A mikrobiológiai vizsgálatokat B. subtilis PCI 219 IS és K. pneumoniae Type 22 3038 A 20680 mikroorganizmusokra végeztük. A frakciókat vákuumban bepároljuk és liofilizáljuk. 6’-Cbz-l ,3,3”-triszalicilal-kanamicin A tartva 3000 ml száraz tetrahidrofuránban oldott 162,3 g (0,787 mól) diciklohexilkarbodiimidet adunk az oldathoz. A reakcióelegyet 24 órán át 22-25 C°-on keveijük, majd 0-5 C°-ra lehűtjük. A diciklohexilkarbamid 2 óra alatt kikristályosodik. A diciklohexilkarbamidot szűréssel eltávolítjuk, és 800 ml tetrahidrofurán-víz 95:5 keverékkel mossuk. A szűrletet és a mosófolyadékokat egyesítjük, és vákuumban 3000 ml térfogatra bepároljuk, 4000 ml metanolt adunk hozzá, és a térfogatát vákuumban ismét 3000 ml-re csökkentjük. Az így kapott oldathoz 40 C°-on 2000 ml abszolút metanolt adunk, 6’-Cbz-l,3,3”-triszalicilal-kanamicin A-val beoltjuk, lehűtjük és 0,5-1 órán át kristályosodni hagyjuk. 1/2 óra alatt 2000 ml vizet adunk az elegyhez és 2 órán át kb. 22—25 C°-on erélyesen keverjük. Ezután a keverék hőmérsékletét 1 órára 0—5 C -ra csökkentjük. A szilárd részeket kiszűrjük és 900 ml hideg metanol-víz 2 : 1 keverékkel, majd 800 ml metanollal mossuk. A szűrletet és a mosófolyadékokat félretesszük. A szűrőlepény lényegileg a visszakapott 6’-Cbz-l,3,3”-triszalicilal-kanamicin A. 9,0 g (14,5 mmól) 6’-Cbz-kanamicin A-t 24 C°-on 500 ml abszolút etanolban szuszpendálunk, és a szuszpenzióhoz 58,2 mmól szalicilaldehidet adunk. A reakciókeveréket visszafolyatással melegítjük, ezalatt a keverékből tiszta, sárga színű oldat lesz, de hamarosan fehér szilárd anyag kezd kiválni. A reakcióelegyet 3 órán át visszafolyatással melegítjük, majd lehűtjük, a terméket kiszűrjük, és kevés abszolút etanollal mossuk. Az így kapott célterméket tetrahidrofurán-metanol-heptán 4:1:5 keverékéből átkristályosítjuk és szárítjuk. Op.: 196-198 C°. Az analízis eredménye a C47H54N4016 összegképletre: Számított: C = 60,62%, H = 5,86%, N = 6,02%, Talált: C = 58,67%, H=5,73%, N = 5,98%. Víztartalom Karl Fischer szerint: 2,45%. A talált értékek a vizet tekintetbe véve: C = 60,14, H = 5,87, N = 6,13%. 19. példa 25 A fenti szűrletet és mosófolyadékot 1000 ml vízzel hígítjuk. Ehhez az oldathoz 2000 ml metilénkloridot adunk. Az oldat pH-értékét 25C°-on 6n sósavval 1,8-2,0-re csökkentjük és 1/2 órán át ezen a pH-értéken tartjuk. 30 A metilénkloridos fázist elkülönítjük, és a vizes fázist még 2000 ml metilénkloriddal mossuk. Az egyesített szerves fázisokat félretesszük a szalicilaldehid lehetséges visszatermelése céljából. A vizes fázis pH-értékét ammóniumhidroxiddal 35 3,5-4,0-re növeljük. Ezt az oldatot szobahőmérsékleten, 3,4 atm nyomáson 5%-os Pd/C katalizátor jelenlétében hidrogéngázzal hidrogénezzük. Az oldat bio-hozama az elméletire számítva 30-45% céltermék. 40 * 20. példa Az I képletű vegyület előállítása az N- 45 -hidroxi-5-norbornén-2,3-dikarboximidet különböző mól%-ban alkalmazva (a többi reagens mól%-konstans marad) Ebben a példában a 0,12 mól N-hidroxi-5-nor- 50 bomén-2,3-dikarboximid (HONB) helyett az alábbi mólszázalékokat használjuk. Az I képletű vegyület hozamait a táblázat szemlélteti: l-N-[L-(-)-7-Amino-a-hidroxi-butiril]-kanamicin A előállítása in situ eljárással Megfelelő berendezésben 1000 g (1,074 mól) 6’-Cbz-l,3,3”-tríszalicilaI-kanamicin A-t 11,400 ml tetrahidrofuránban 22—25C°-on szuszpendálunk. A szuszpenzióhoz keverés közben 600 ml vizet adunk. 60 10 perc alatt oldat képződik. Szilárd alakban 181,5 g (0,716 mól) 4-benziloxikaibonilamino-2- -hidroxi-vajsavat és 0,12 mól N-hidroxi-5-norbomén-2,3-dikarboximidet adunk az oldathoz. Az oldat pH-értéke 5,5-6,0. A hőmérsékletet 22—25 C°-on 65 Kísérlet Mól% Az I képletű 55 száma HONB vegyület hozama, % 1. 0 9,33 2. 2 20,07 3. 10 31,72 4. 50 36,52 5. 100 36,01 13
