172223. lajstromszámú szabadalom • Eljárás egy diszulfidhídon kívól legalább egy ciszteingyököt tartalmazó peptidek előállítására
23 172223 24 keletkezett trietilamin-hidrokloridot szűréssel elkülönítjük és a dipeptid-származékot amorf porként csapjuk ki oly módon, hogy a szűrletet 500 ml vízbe csepegtetjük 0°-on. Vékonyrétegkromatogramban szilikagélen Rf (1:1 arányú) ciklohexán-etilacetát rendszerben =0,51; (8:2 arányú) toluol—aceton rendszerben Rf =0,6. b) H-Cys(Trt)-Cly-OMe 4 g Trt-Cys(Trt)-Gly-OMe-t 40 ml jégecetben oldunk és 5 perc leforgása alatt cseppenként hozzáadunk összesen 10 ml vizet. A hozzácsepegtetés befejezése után az elegyet még 30 percig keverjük szobahőmérsékleten, utána további 30 ml vizet adunk hozzá, még 30 percig 0”-on keverjük és ezt követően a keletkezett trifenilkarbinolt szűréssel elkülönítjük. A szűrletet etilacetáttal felülrétegezzük és 0°-on telített nátriumkarbonát-oldattal a pH-t 9—10 értékre állítjuk be. A szerves fázist vízzel mossuk és szárazra betöményítjük, mimellett sárga, gyantaszerű terméket kapunk. Vékonyrétegkromatogramban szilikagélen Rf értéke (9:1 arányú) kloroform—metanol elegyben =0,6; (9: 1 arányú) butilacetát—metanol elegyben Rf =0,35; Rfj2 =0,6. c) Acetil-Gly-Cys(Trt)-Gly-OMe I, 27 g acetil-Gly-OH-t és 1,51 ml trietilamint feloldunk 11 ml etilacetát és 2 ml DMF elegyében, az oldatot — 20°-ra hűtjük és 1,33 ml pivalinsavkloridot adunk hozzá. Az elegyet 15 percig — 10°-on keverjük, utána 3,62 g H-Cys(Trt)-Gly-OMe 15 ml etilacetát és 1 ml DMF elegyével készített oldatát adjuk hozzá, 1 óra hosszat 0°-on keverjük és éjszakán át 5°-on állni hagyjuk. Az elegyet ezután etilacetáttal hígítjuk, egymásután citromsav-oldattal, nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és vízzel mossuk és szárazra pároljuk. A maradékot etilacetát—petroléter elegyből átkristályosítjuk. Op. 192— 193°. Vékonyrétegkromatogramban szilikagélen Rf értéke (9:1 arányú) kloroform—metanol elegyben =0,36; Rf értéke (8: 2 arányú) butilacetát—metanol elegyben = =0,35; RfJ2 =0,65. II. Z-Phe-Cys(Acm)-GIy-OMe 1,95 g Z-Phe-OH-t és 0,77 ml N-metilmorfolint 10 ml etilacetátban oldunk, az oldathoz — 20°-on 0,8 ml pivalinsavkloridot adunk és az egészet 15 percig —10° - on keverjük. A reakcióelegyhez ezután hozzáadjuk 1,5 g H-Cys(Acm)-Gly-OMe.HCl (lásd 3. példa 5. pontját) 5 ml DMF-fel készített oldatát, az elegyhez adunk még 20 ml etilacetátot, valamint 0,66 ml N-metilmorfolint, az egészet 1 óra hosszat 0°-on keverjük és éjszakán át 5°-on állni hagyjuk. Feldolgozáshoz az elegyet n-butanolban felvesszük és egymásután citromsav-oldattal, nátriumhidrogénkarbonát-oldattal és vízzel mossuk, majd a szerves fázist szárazra betöményítjük. A maradékot metanol—etilacetát—petroléter elegyből átkristályosítjuk. Op. 185—186°. Vékonyrétegkromatogramban szilikagélen Rf értéke (9: 1 arányú kloroform—metanol elegyben =0,6; Rf52 =0,65; és Rf43£ =0,6. A fentiekben leírtakhoz hasonlóan 2,7 g peptid I és 2,7 g peptid II vegyületeket 1,2 ml 2,2,2-trifíuoretanolban oldunk és az oldatot 0,3 ml 0,2 mólos KJ-tartalmú vizes jódoldattal (Titrisol-Merck) kezeljük. Az elegyet 10 percig szobahőmérsékleten állni hagyjuk és utána a fenti módon feldolgozzuk. A reakcióoldatból a cisztinpeptid Ill-t és a ciszteinpeptid Il-t egyedüli peptidekként vékonyrétegkromatográfiásan eluáljuk. Rf-értékek, ahogy fent megadtuk. Ugyanezekhez az eredményekhez jutunk, ha a trifluoretanol helyett a következő oldószereket alkalmazzuk: 1,1,1,3,3,3-hexaklóraceton; 1,1,1,3,3,3-hexafluoraceton-trihidrát ; 2,2,2-triklóretanol; 2,2,2-tribrómetanol és 1,1,1 -trifluoraceton. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás egy diszulfidhídon kívül legalább egy ciszteingyököt tartalmazó peptidek előállítására, melynek során a peptid felépítéséhez szükséges aminosavakat a peptidkémiában szokásos eljárások valamelyikével, adott esetben a funkciós csoportok védése mellett kondenzáljuk, és legalább két ciszteingyököt diszulfidhíd kialakítása mellett cisztingyökké oxidálunk, azzal jellemezve, hogy egy vagy két ciszteintartalmú aminosavláncban, melyek összesen legalább három ciszteingyököt tartalmaznak, két, összekapcsolandó ciszteingyököt valamely R! általános képletű fenil-(rövidszénláncú)-alkil-, illetve fenil-(3—7 szénatomos)-cikloalkilcsoporttal — ahol a fenilcsoport adott esetben 1—7 szénatomos alkil- vagy 1—7 szénatomos alkoxicsoporttal lehet szubsztituálva, és a merkaptocsoport kénatomjához kapcsolódó szénatom legalább egy, fentiek szerint adott esetben szubsztituált fenilcsoportot tartalmaz — védünk, a további ciszteingyököt vagy -gyököket pedig R2 általános képletű rövidszénláncú alkanoilaminometil- vagy benzoil-aminometilcsoporttal védjük, majd a peptidet vagy peptideket valamely polihalogénezett, 2—5 szénatomot tartalmazó alkanol, alkanon vagy alkánkarbonsav-(rövidszénláncú)-alkilészter, előnyösen trifluormetanol vagy l,l,l,3,3,3-hexafluor-2-propanol jelenlétében jóddal oxidáljuk, miközben az R, általános képletű védőcsoportok szelektíve lehasadnak, és diszulfidhíd képződik, majd a fenti polihalogénezett vegyület reakcióelegyből történő eltávolítása után kívánt esetben a szintézis bármely szakaszában önmagában ismert módon az R2 általános képletű védőcsoportot vagy -csoportokat lehasítjuk és kívánt esetben a kapott peptidet önmagában ismert módon ismét oxidáljuk, mikor is további diszulfidhíd vagy -hidak alakulnak) ki.(Elsőbbsége: 1974. május 23.) 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a ciszteingyököket az Rj általános képletű védőcsoportok közé tartozó tritilcsoporttal védjük. (Elsőbbsége: 1974. május 23.) 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a cisztingyököt vagy -gyököket az R2 általános képletű védőcsoportok közé tartozó acetilaminometilcsoporttal védjük. (Elsőbbsége: 1974. május 23.) 4. Az 1—3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy polihalogénezett vegyület ként valamely polihalogénezett alkanolt, előnyösen 2,2,2-trifluoretanolt vagy 1,1,1,3,3,3-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 !2
