172216. lajstromszámú szabadalom • Eljárás klavulánsav és sói elkülönítésére
17 172216 18 dextrin1 2 vegyes% Arkasoy 1 vegyes% Scotasol 0,1 vegyes% vas(II)-szulfát-heptahidrát 0,01 vegyes% A beoltott lombikokat 26 °C-on rázatjuk. Optimális ß-laktamaz inhibitálási aktivitás 3—5 napon belül érhető el. Ez az aktivitás hasonló a 2. példában említett aktivitáshoz, illetve a klavulánsav koncentrációja itt is 250—350 mikrogramm/ml. 4. példa Streptomyces clavuligerus tenyésztése Az 1. példában ismertetett módon 500 ml-es Erlenmeyer-lombikba töltött 100—100 ml, ionmentes vízzel készült tápfolyadékot — amelynek összetétele az alábbi — beoltunk : dextróz 1 vegyes% szójababliszt 1 vegyes% Scotasol 0,05 vegyes% kalcium-karbonát 1 vegyes% A lombikokat pontosan az előző példákban ismertetett módon kezeljük és a tenyésztést is azonos körülmények között végezzük. Az optimális fi-laktamáz inhibitálási aktivitás 3—5 napon belül érhető el. A szűrt tenyészet 1/2500-szoros hígításának aktivitása 35—45%. A klavulánsav koncentrációja 40—80 mikrogramm/ml. 5. példa Streptomyces clavuligerus tenyésztése Az 1. példában ismertetett módon tenyésztést végzünk az alábbi összetételű, ionmentes vízzel készült tápfolyadékban: glicerin 2 vegyes% szójababliszt 1,5 vegyes% magnézium-szulfát 0,1 vegyes% kálium-hidrogén-foszfát 0,1 vegyes% A maximális ß-laktamäz inhibitálási aktivitást 3—5 napon belül érjük el. Az aktivitás hasonló nagyságrendű, mint a 4. példában elért aktivitás, illetve a klavulánsav koncentrációja itt is 40—80 mikrogramm/ml. 6. példa Streptomyces clavuligerus tenyésztése Az 1. példában ismertetett módon tenyésztést végzünk az alábbi összetételű, ionmentes vízzel készült tápfolyadékban. glükóz 2% Láb Lemco (Oxoid cég terméke) 1% élesztőkivonat (Oxoid cég terméke) 0,3% kalcium-karbonát 0,3% Az optimális titer 3—5 napon belül érhető el, a szűrt *ÂÿÉ«Bet 1/2500-szoros hígításának aktivitása a (J-laktáhaáz enzim inhibitálásában 35—45%. A klavulánsav koncentrációja 40—80 mikrogramm/ml. 7. példa Streptomyces clavuligerus tenyésztése Az 1. példában ismertetett módon tenyésztést végzünk az alábbi összetételű, ionmentes vízzel készült tápfolyadékban: glükóz 2 vegyes% Arkasoy 1 vegyes% kalcium-karbonát 0,02 vegyes% kobalt(Il)-klorid-hexahidrát 0,0001 vegyes% Az optimális titer a beoltástól számítva 3—5 napon belül érhető el. A szűrt tenyészet 1 /2500-szoros hígításának aktivitása 35—45%. A klavulánsav koncentrációja 40—80 mikrogramm/ml. 8. példa Az 1. példában ismertetett módon tenyésztést végzünk 2% Scotasol-t és 1% élesztőkivonatot (az Oxoid cég terméke) tartalmazó, csapvízzel készült 7,0 pH-jú tápfolyadékban. A beoltástól számítva 3—5 napon belül érhető el az optimális titer. A szűrt tenyészet 1/2500-szoros hígításának aktivitása 20—30%, a szűrt tenyészet papírkromatográfiás vizsgálatának tanúsága szerint 0,46 Rf értéknél észlelhető a klavulánsav zónája. A klavulánsav koncentrációja 40—80 mikrogramm/ml. 9. példa Streptomyces clavuligerus tenyésztése Az előző példákban ismertetett módon az alábbi öszszetételű, ionmentes vízzel készült és 7,1 végső pH-jű tápfolyadékban tenyésztést végzünk. g/1 glicerin 15 szacharóz 20 prolin 2,5 mononátrium-glutamát 1.5 nátrium-klorid 5,0 kálium-hidrogén-foszfát 2,0 kalcium-klorid 0,4 mangán(II)-klorid-tetrahidrát 0.1 vas(III)-klorid-hexahidrát 0,1 cink-klorid 0,05 magnézium-szulfát-heptahidrát 1,0 A beoltástól számítva 3—5 napon belül étjük el a maximális titert. A szűrt fermentlé 1/2500-szoros hígításának aktivitása 20—30%. A klavulánsav koncentrációja 40—80 mikrogramm/ml. 10. példa Streptomyces clavuligerus tenyésztése Yeatexet és glükózt tartalmazó agar-agar alapú ferde törzstenyészetet használunk Roux-palackban elhelyezett, Yeatexet és glükózt tartalmazó agar-agar alapú ferde tenyészet beoltására úgy, hogy elkészítjük a micélium és spóra steril vizes szuszpenzióját. A Roux-pa-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 9
