172209. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az antraciklin-glikozidjellegű aklacinomicin a és b tumorellenes antibiotikum előállítására
5 172209 6 A találmány szerint tehát az aklacinomicin A és B nevű tumorellenes antibiotikum előállítására úgy járunk el, hogy a Streptomyces galilaeus aklacinomicint termelő, ATCC 31133 azonosítási jelzésű törzsét szén- és nitrogénforrásokat tartalmazó táptalajon, süllyesztett, levegőztetett fermentációs körülmények között addig tenyésztjük, míg az említett mikroorganizmus az említett táptalajon jelentős mennyiségű aklacinomicin A-t és B-t termel. A táptalajon történő tenyésztést 25 C° és 30 C° közötti hőmérsékleten, 5 és 8 közötti pH-érték mellett végezzük, és ha szükséges, a táptalajból az aklacinomicineket előnyösen oldószeres extrakcióval, oldószeres kicsapással, betöményítéssel, gélszűréssel, ellenáramú megosztással, fémionokkal történő kelátképzéssel vagy ioncserélő gyantán, diatómaföldön, vagy szintetikus adszorbensen történő adszorpcióval, majd ezt követő elúcióval nyerjük ki. Az aklacinomicineket tartalmazó oldat fagyasztva szárítása, valamint az aklacinomicineket tartalmazó oldatnak dezoxiribonukleinsav, glicerin, valamely cukor, aminosav, szervetlen vagy szerves sav hozzáadása után történő fagyasztva szárítása ugyancsak beletartozik a találmány szerinti eljárások körébe. Az 1. ábrán az aklacinomicin A ultraibolya abszorpció spektruma látható, A a metanolban, B a 0,1 normál sósav-metanolban és C a 0,1 normál nátrium-hidroxid-metanolban felvett görbét jelöli. A 2. ábrán az aklacinomicin A kálium-bromid pasztillában felvett infravörös abszorpciós spektruma látható. A 3. ábrán az aklacinomicin A deutero-kloroformban felvett NMR-spektruma látható (100 MHz, belső standard: tetrametil-szilán). (A tetrametil-szilán kémiai eltolódása : 0.) A 4. ábrán az aklacinomicin B ultraibolya abszorpciós spektruma látható, A a metanolban, B a 0,1 normál sósav-metanolban és C a 0,1 normál nátrium-hidroxid-metanolban felvett görbét jelöli. Az 5. ábrán az aklacinomicin B kálium-bromid pasztillában felvett infravörös abszorpciós spektruma látható. A 6. ábrán az aklacinomicin B deutero-kloroformban felvett NMR-spektruma látható (100 MHz, belső standard: tetrametil-szilán). Az aklacinomicin A és B az L1210 és P388 leukémia- és a 6C3HED lymphoma-sejtekkel fertőzött egerek élettartamát jelentősen meghosszabbítja, és testi állapotukra jótékony hatást fejt ki, patkányokon, egereken és nyulakon mért halálos adagja (LD50) magas, és hörcsögökön rendkívül kismértékű kardiotoxicitást mutat. Részletesebben, e vegyületek sejttenyészetek különféle tumorsejtjeinek növekedését specifikus, a ribonukleinsav-szintézist gátló hatásuk révén gátolják, valamint baktériumokkal és élesztőgombákkal szemben is erős antimikrobiális hatást fejtenek ki. Az aklacinomicin A és B sárga színű, mikrokristályos por formájában izolálható, összegképlete ill. C42H52NOj5. Savas hidrolízis vagy metanolban végzett részleges hidrolízis során az aklacinomicin A-ból aklavinon, rodózamin, 2-dezoxi-fukóz, 1-dezoxi-pirromicin és cinerulóz A, az aklacinomicin B-ből aklavinon, rodozamin, 2-dezoxi-fukóz, 1-dezoxi-pirromícin és ugyanaz a metilezett diszacharid keletkezik, mint a cinerubin B-ből. Az aklacinomicin A és B metanolban, etanolban, kloroformban, acetonban, etil-acetátban, benzolban és homológjaiban oldható, vízben kismértékben oldható, viszont hexánban, ciklohexánban, éterben és petroléterben nem oldható, az infravörös tartományban (kálium-bromid pasztillában), valamint az ultraibolya és látható fény tartományában jellemző abszorpciós maximumokat mutat, amint ez az 1., 2., 4. és 5. ábrán látható, NMR-spektrumuk van, mint ez a 3. és 6. ábrán látható, az aklacinomicin A kloroformban mért fajlagos forgatóképessége +29°, olvadáspontja 129— 135 C°, az aklacinomicin B megfelelő értékei + 3°, ill. 135—145 C°. Habár számos, az antraciklin-glikozidok csoportjába tartozó antibiotikum, mint például az adriamicin, a daunomicin, a karminomicin, a rodomicin, a pirromicin, az aklavin stb. széles körben ismert, a találmány szerinti eljárással előállított aklacinomicinek összegképletük, savas hidrolízisük során nyert bomlástermékeik, ultraibolya-, látható, infravörös- és NMR-abszorpciós spektrumuk, és más adatok alapján a fenti vegyületek bármelyikétől világosan megkülönböztethetők, amint azt a fentiekben már leírtuk. Ezenkívül, erős tumorellenes aktivitásuk és rendkívül kismértékű kardiotoxicitásuk olyan jellemzők, amelyek az antraciklin-glikozidok csoportjába tartozó tumorellenes antibiotikumok egyikénél sem figyelhetők meg. Az aklacinomicin A és B nevű antibiotikumot a találmány szerinti eljárással termelő mikroorganizmust egy Japánban (Tokió, Shinagawa-ku, Osaki) vett talajmintából izoláltuk. Az MA 144—Ml törzs egy tenyészetét az American Type Culture Collection, Rockville, Maryland és a Fermentation Research Institute, Japan, állandó mikroorganizmus gyűjteményében letétbe helyeztük ATCC 31133, ill. FERM 2455 számon. Az MA144—Ml törzsnek a következő tulajdonságai vannak: 1. Morfológiai tulajdonságai: Mikroszkóp alatt az elágazó szubsztrát-micéliumból erősen kinyúló nyitott spirálokat figyelhetünk meg. Hurkok nincsenek, és a tíznél több spórát tartalmazó érett spóralánc mérsékelten hosszú. A spórák tojásdadok, méretük 0,4 jz-tól 0,8 fi. X0,8 [i.-tól 1,6 u, felületük sima. 2. Tulajdonságai különböző táptalajokon: A zárójelek közé tett jelek a Container Corporation of America, USA által kiadott „Color Harmony Manual” (A színek összhangjának kézikönyve) színstandardjainak jelzései. a) 27 Cn-on inkubált glükóz-aszparagin-agaron világos sárgás-barna növekedés (3gc, sárgásbarna); légmicélium nincs; oldódó színanyag nincs. b) 27 C°-on inkubált szacharóz-aszparagin-agaron színtelen vagy világos sárgásbarna növekedés (3gc, sárgásbarna); légmicélium nincs; oldódó színanyag nincs. c) TI C°-on inkubált glicerin-aszparagin-agaron (ISP 5. számú táptalaj) sárgás narancsszínű (4ic, napbarnított színű) — barna (51 g, kakaóbarna) színű növekedés; fehér-világosszürke (2fe, fátyolszürke) színű légmicélium ; barna oldódó színanyag. d) 27 C°-on inkubált keményítő-szervetlen só-agaron (ISP 4. számú táptalaj) halvány narancsszínű (3ea, 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
