172183. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 4-dezacetoxi-vinkrisztin és savaddíciós sói előállítására
5 172183 6 értékre állítjuk, előnyösen két lépésben, először 5—7, majd 8—9 pH-értékre állítjuk be. Ezt követően az oxidáció termékeit (célvegyület és az N-dezmetil-vegyület keveréke) például oszlopkromatográfiás módszerrel elválasztjuk, majd az N-dezmetil-komponenst formilezzük. Előnyösen azonban úgy járunk el, hogy a vegyületkeveréket formilezzük. A formilezést valamely a reakció szempontjából iners oldószerben, például valamely benzolhomológ jelenlétében végezzük. Előnyösen azonban a formilezést magában a formilező elegyben, hangyasav és ecetsavhidrid elegyében végezzük. A formilezést 0 °C és 15 °C közötti, előnyösen 0 °C és 5 °C közötti hőmérsékleten végezzük, majd a reakcióelegy pH-értékét 7—10 közötti, előnyösen 8—9,5 közötti értékre állítjuk be. A lúgos oldatból a terméket valamely iners szerves oldószerrel, célszerűen valamely benzolhomológgal, mint például benzollal, xilollal, vagy toluollal, vagy valamely klórozott szénhidrogénnel, előnyösen metilénkloriddal vagy kloroformmal extraháljuk és az extratkumok bepárlásával nyert nyers terméket például oszlopkromatografálással és/vagy kristályosítással tisztítjuk. Kromatografálás esetén adszorbensként részlegesen dezaktivált, célszerűen 111 aktivitású alumíniumoxidot, eluensként iners szerves oldószert, például benzolt, toluolt vagy xilolt és/vagy valamely klórozott szénhidrogént, célszerűen kloroformot vagy metilénkloridot alkalmazunk. A 4-dezacetoxi-vinkrisztin főtömegét tartalmazó eluátumfrakciókból bepárlással, a megelőző és a főtömeget követő eluátumfrakciókból bepárlással majd azt követően újabb kromatografálással nyerjük ki a terméket. A két frakciót külön-külön, vagy egyesítve kívánt esetben a már ismertetett módon átkristályosítjuk, majd kívánt esetben savaddíciós sóvá, előnyösen szulfátsóvá alakítjuk. A kapott 4-dezacetoxi-vinkrisztint és/vagy savaddíciós sóját előnyösen parenteráiisan adagolható készítménnyé alakítjuk. Ebből a célból a vegyületet desztillált vízben vagy fiziológiás só-oldatban és adott esetben rövidszénláncú alifás alkoholban vagy glikoléterben oldjuk. A hatóanyagot előnyösen liofillizátum formájában oldjuk a megfelelő oldószerben. Adalékanyagként az oldat különböző konzerválószereket (benzilalkohol, p-oxi-benzoesavészterek), antioxidánsokat (aszkorbinsav, tokoferol, stb.), tejcukrot, pufferanyagokat és adott esetben egyéb gyógyhatású anyagokat (például helyi érzéstelenítő fájdalomcsillapító vagy más ismert citosztatikum) tartalmazhat. A 4-dezacetoxi-vinkrisztin a felsorolt egyéb gyógyhatású anyagokkal szinergetikus hatást nem mutat. Az oldatot ampullázás előtt és/vagy után sterilizáljuk. Az előállított 4-dezacetoxi-vinkrisztin optikai forgátóképességét Opton polariméteren mértük, a protonmágneses magrezonancia spektrumot Varian EM 360 spektrométeren vettük fel. Eljárásunkat az alábbi példákkal szemléltetjük anélkül, hogy igényünket a példákra korlátoznánk. 1. példa 4-dezacetoxi-vinkrisztin 12 g (0,0159 mól) 4-dezacetoxi-vinblasztint 2640 ml acetonhan okiunk, majd krómsavról ledesztilláft 600 ml jégecetet adunk hozzá. Az oldatot — 55 °C-ra hűtjük és keverés közben —55, —60 °C-ra hűtött 5,94 g (0,135 mól) krómsavat tartalmazó 2000 ml ecetsavanhidridet adagolunk az oldathoz. A reakció lejátszódása után az elegy pH értékét — 35°Cés —40 °C közötti hőmérsékletre hűtött tömény vizes ammóniumhidroxid-oldattal 6-ra állítjuk be. A közömbösítésnél olyan mértékű hűtést alkalmazunk, hogy az elegy hőmérséklete 50 °C fölé ne emelkedjék. A meglúgosított reakció-elegyet 9 liter desztillált vízzel hígítjuk, majd a felhígított oldatot 25%-os ammóniumhidroxid-oldattal 8,5 pH érték eléréséig tovább lúgosítjuk. A reakcióelegyet ezután négyszer 1500 ml metilénkloriddal kivonatoljuk, majd az egyesített metilénkloridos fázisokat háromszor 1000 ml desztillált vízzel a melléktermékként jelentkezett ammóniumacetát eltávolítása céljából mossuk. A fázisokat szétválni hagyjuk, a metilénkloridos oldatot nátriumszulfáttal vízmentesítjük, szűrjük, majd a szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A nyers 4-dezacetoxi-vinkrisztinből és N-dezmetil-4-dezacetoxi-vinblasztinból álló száraz maradékot 60 ml tömény hangyasav és 10 ml ecetsavanhidrid elegyében oldjuk, majd az oldatot 300 ml 0—5 °C közötti hőmérsékletre hűtött vízbe öntjük és keverés közben 0—5 °C-ra hűtött tömény vizes ammóniumhidroxid-oldattal a pH értéket 9-re állítjuk be. A lúgos oldatot háromszor 100 ml metilénkloriddal kivonatoljuk, az egyesített majd vizmentesített metilénkloridos fázisokat csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A kapott 9,8 g 4-dezacetoxi-vinkrisztint oszlop kromatográfiás módszerrel tisztítjuk. 9,8 g dezacetoxi-vinkrisztint 60 ml benzolban oldunk, majd az oldatot 500 g III aktivitású alumíniumoxidból és benzolból kialakított 45 mm átmérőjű kromatografáló oszlopra felvisszük. Az eluálást 1200 ml benzollal kezdjük, majd 5000 ml 2: 1 arányú benzol-kloroform-eleggyel, ezt követően 3000 ml 1: 1 arányú benzol-kloroform-eleggyel, majd 800 ml kloroformmal folytatjuk. 400 ml-es eluátumfrakciókat fogunk fel. A termék főtömegét tartalmazó 15—20. frakciókat egyesítjük és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. Kitermelés: 6,5 g 4-dezacetoxi-vinkrisztin (1. frakció). A 11—14. és 21—26. frakciókból az alábbi módon további 4-dezacetoxi-vinkrisztint nyerhetünk ki. Az egyesített 11—14. és 21—26. frakciókat csökkentett nyomáson bepároljuk, a bepárlási maradékot (1,75 g) 15 ml benzolban oldjuk és az oldatot 90 g ill aktivitású alumíniumoxidból benzollal kialakított kromatográfiás oszlopon átfolyatjuk. Az oszlopról a másodterméket 1200 ml 2: 1 arányú benzol-kloroform eleggyel eluáljuk, és az eluátumot csökkentett nyomáson bepároljuk. Kitermelés: 1,05 g 4-dezacetoxi-vinkrisztin (2. frakció). A fentiek szerint kapott 1. és 2. frakciót egyesítjük, 60 ml 3:2 arányú metanol-víz elegyben oldjuk és 16 órán át 5 °C-on kristályosodni hagyjuk. A kivált kristályokat szűrjük 10 ml 5 °C-ra hűtött 3: 2 arányú metanol-víz eleggyel mossuk, vákuumban szárítjuk. Kitermelés: 7,0 g 4-dezacetoxi-vinkrisztin. Op.: 205—209 °C. [*]d = + 105,7° (c = 1, kloroformban). Infravörös színkép: hasonló a 4-dezacetoxi-vinblasztinéhoz, v = 1672 cm-,-nél azonban megjelenik az N-formil gyökre jellemző abszorpciós sáv. Tömegspektrum : a molekulaioncsúcs m/e = 766 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
