171962. lajstromszámú szabadalom • Eljárás laktát-dehidrogenáz izomerjeinek egyidejű vagy külön történő meghatározásáram és diagnosztikai eszköz a meghatározás elvégzésére

7 161962 8 önmaga végrehajtani. A hüvelybe helyezés után 15-30 perccel mutatkozó kékes elszíneződés jelzi patológiás elváltozás veszélyét és figyelmeztető jel arra, hogy szakorvost szükséges felkeresni. Ha a felhasznált tampon, kihúzózsinór vagy kihúzócsík hosszabb időn át tartó tárolására és ezért konzerválására van szükség (amire különösen az orvos által történő alkalmazás esetében van szükség, vagy akkor, ha a megbetegedett nő például a tampont az orvoshoz postán akarja eljuttatni), akkor a felhasznált tampont utókezelni kell, éspedig az esetlegesen kellemetlen szag leküzdésére, a tampon fertőtlenítésére és az elszíneződésnek hosszabb időn át történő tárolás céljából való stabilizálására. Azt találtuk, hogy ez az utókezelés úgy oldható meg, hogy a felhasznált tampont 20%-os paraloidoldatba (a paraloid a Merck cég terméke, az oldószer toluol) mártjuk. Míg az LDH meghatározására eddig ismert módszerek kifejezetten laboratóriumi módszerek és a korábban már részletezett hátrányokat mutatják, a találmány szerinti eljárás és tesztkompozíció lehetővé tesz gyors, bizonyos alkalmazási célokra (például a hüvelyváladék vizsgálatára) kielégítően kvantitatív meghatározást akár tanulatlan felhasználó által. Ez különösen fontos daganatos megbetegedések esetében. Daganattal szenvedő betegek testnedveiben a szakirodalom tanúsága szerint napjainkig 26 enzimet tanulmányoztak. Az LDH-nak a legnagyobb a diagnosztikai érzékenysége, a vérszérumban (nem exkrétumban) 40—90%-os koncentrációnövekedése észlelhető. Bizonyított tumor esetében az LDH mennyiségének sorozatos meghatározása alkalmasnak bizonyul a betegség lefolyásának és a kezelés eredményességének ellenőrzésére annak ellenére, hogy az LDH koncentrációjának növekedése korántsem tumorspecifikus, azonban mindig jelzés egy súlyos megbetegedésre és egyéb tünetekkel összefüggésben alkalmas lehet tumorgyanu igazolására. A tamponokra felvitt, ismertetett előnyös tesztkompozíciót sorozatvizsgálatban kipróbáltuk közel 100 főből álló kísérleti csoporton, amelyhez egészséges, valamint Carcinoma colli uteri, Carcinoma corporis és Carcinoma in situ megbetegedésben szenvedő nők tartoztak. A lehetőség szerinti legjobb eredmények elérése céljából a tampon 15—30 percen át maradt a hüvelyben. Közvetlenül a kivétel után az alábbi elszíneződések figyelhetők meg: nincs elszíneződés negatív rózsaszínű elszíneződés még negatív világoskék ibolyás árnyalattal + kék ++ sötétkék +++ Ha kék (++) vagy sötétkék (+++) elszíneződés jelentkezikT akkor minden esetben rákos megbetegedésről van szó, mint ezt a patológiai leletek igazolták. Világoskék (+) elszíneződés esetében szinte minden alkalommal a „változási periódus" diagnózis állapítható meg. Rózsaszínű elszíneződést kizárólag egészséges nőknél észleltünk (a terhesség 15. napjáig terheseknél is). Az in vitro meghatározási eljárást, azaz például a vérszérumban vagy vérplazmában végzett meghatározást önmagában ismert módon hajtjuk végre. Az egyetlen szükséges változtatás pufferspecifikus 5 pH-érték, célszerűen 6,0 és 6,5 közötti érték beállítása, szemben az eddig alkalmazott, erősebben bázikus értékkel, így tehát közelebbi leírására nincs szükség. Az LDH abszolút mennyiségének meghatározására a mért elszíneződés azonosítható szab-10 ványosított LDH-mintákkal végzett összehasonlítás útján. Ezek a hitelesített, illetve szabványosított minták — mint azt a tamponok konzerválásával kapcsolatban már ismertettük — színe hosszabb időre megőrizhető. 15 Az alábbi példák két olyan lehetőséget ismertetnek, amelyekkel a találmány szerinti tesztkompozíció tamponra felvihető. 20 a) Bemártásos módszer Szokásos higiéné-tamponokat, például a Dr. Carl Hahn cég által gyártott „o.b." tampont, közepükön övszerűen 1 cm széles „Tesaband" ra-25 gasztószalaggal egy-kétszer szorosan körbetekerünk, majd a tampon védőborítóját a tamponnak a kihúzószállal ellentétes oldalán felnyitjuk. Ezáltal a tamponnak (amely henger alakú) a keresztmetszeti felülete a külvilág felé nyitott. Ezután 18 ml tér-30 fogatú, hengeres reakcióedények (DIN-formátumúak, a mainzi Schott cég gyárt például ilyen edényeket) alját eltávolítjuk, majd az így kapott üvegcsövekbe a tampont úgy vezetjük be, hogy a külvilág felé nyitott részének felülete pontosan áz 35 üvegcső végén legyen. A kihúzószálat az üvegcső másik végén valamilyen ragasztóval vagy „Tesaband" ragasztószalaggal rögzítjük. Az üvegcsövet ezután a korábban említett összetételű előnyös tesztkompozícióba mártjuk és addig tartjuk benne, 40 míg a tampon nyitott végén 2,0 ml folyadékot felszív. Természetesen mind a tesztkompozíciós oldat elkészítését, mind a vele végzett és itt ismertetett műveleteket sötétkamrában monokromatikus fénynél (így vörös fényű fotólámpák, például az 45 úgynevezett „Rotlicht" lámpa mellett) végezzük. Az így kezelt tamponokat az üvegcsövekkel együtt sötétben fagyasztva szárítjuk, majd az így szárított tamponokat a csövekből eltávolítjuk, pél-50 dául kihúzószáluknál fogva, és még mindig sötétben, illetve fotófény mellett sötétkamrában a fényt át nem eresztő papírral, illetve fóliával vagy színes papírral becsomagoljuk és fénytől védve tároljuk. 55 b) Injekciós módszer A következő műveleteket sötétkamrában végezzük. 2 ml-es fecskendővel a korábban ismertetett előnyös tesztkompozícióból 2,0 ml-t a tam-60 ponba injektálunk úgy, hogy a tamponnak a kihúzófonallal ellentétes' oldalán a védőborítást az injekcióstűvel átszúrjuk és a tűt a tampon hosszanti irányában a tampon másik végéig vezetjük, miközben lassan fecskendezünk. így érjük el, 65 hogy a tampon egyenletesen legyen átnedvesítve. 4