171790. lajstromszámú szabadalom • Eljárás teikomicint tartalmazó antibiotikum-elegy és egyes faktorainak előállítására
5 171790 6 Táptalaj Tenyésztési tulajdonságok Zabliszt agar (60%) Lefölözött tej agar Kalcium-malát agar Agar Zselatin Nitrát-tartalmú tenyészlé Nagymértékű növekedés sima felülettel, halvány narancs 9/B/5, amely az idő múlásával világos narancsos barnára 12/B/8 változik — jelentős sporangiumképződés, világos rózsaszín 9/B/5, világos mogyoró-barna oldható pigment. Nagymértékű növekedés sima felülettel, égetett borostyánszínű 15/A/12, Mély — borostyán színű oldható pigment 7/E/12. Gyér növekedés, sima és vékony felülettel, halvány narancs 9/B/5 — Mérsékelt sporangiumképződés. Mérsékelt növekedés, színtelen jelentős sporangiumképződés. Borostyánszínű oldható pigment. Borostyánszínű oldható pigment. A színmeghatározást Maerz és Paul (Maerz, A. és M. Reg. Paul 1950. A Dictionary of Color, 2nd ed., M. Grow—Hill Book Company, Inc., New York) módszerével végeztük. A számmal ellátott táptalajok számai a Shirling és Gottlieb által adott számok. II. táblázat Szén felhasználás Növekedés Szénforrás + + + + + + + + Inozit Fruktóz Ramnóz Mannit Xilóz Raffinóz Arabinóz Cellulóz Szalicin Szacharóz ^ Mannóz Laktóz Glükóz (pozitív kontroll) — nincs felhasználás + bizonytalan felhasználás + + erősen pozitív felhasználás III. táblázat Fiziológiai tulajdonságok + + + + + + + Keményítő hidrolízis H2 S keletkezés Színanyagképzés Tirozin hidrolízis + + + + + + 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Kazein hidrolízis + + + Ca-malát hidrolízis — Lakmuszos tej koagulálás — Lakmuszos tej peptonizáció + Nitrát redukció + + Zselatin cseppfolyósítás + + Cellulóz bontás — — negatív reakció + H- pozitív reakció + gyengén pozitív reakció + + + erősen pozitív reakció Az antibiotikus anyagok előállítása céljából az Actinoplanes teichomyceticus nov. sp. ATCC 31 121 törzset aerob körülmények között táptalajban körülbelül 6—8 pH érték tartományban elő-tenyésztjük, amíg jelentős micéliumképződés jön létre. Például egy rázólombikos kultúrában a következő összetételt állíthatjuk össze g/l értékekben: Hús extraktum 3,0 Tripton 5,0 Élesztő extraktum 5,0 Glükóz 1,0 Oldható keményítő 24,1 Kalcium-malát 4,0 Desztillált vízzel feltöltve 1000 ml-re. A lombikokat körülbelül 24 óra hosszat rázatjuk körülbelül 28—30 C° hőmérsékleten, majd ezeket az előtenyészeteket (1 liter) használjuk a fermentorok beoltására, amelyek mindegyike1 10 liter alábbi összetételű táptalajt tartalmaz: Hús extraktum Pepton Élesztő extraktum Nátriumklorid Szója-liszt Glükóz Kalciumkarbonát Csapvízzel feltöltve 40 g 40 g 10 g 25 g 100 g 500 g 50 g 10 literre A fermentorokat aerob körülmények között, keverés közben 28—30 °C hőmérsékleten inkubáljuk. Az antibiotikus aktivitást időnként mikrobiológiai úton vizsgáljuk agar diffúziós módszerrel, Staphylococcus aureus-t használva vizsgálati organizmusként. A maximális aktivitást 72—96 órás fermentáció után érjük el. A szűrt táptalajban és a micéliumtömegen egyaránt jelenlevő antibiotikum elegyet önmagában ismert el-55 járással szerves oldószerekkel extrahálhatjuk. A szűrt tenyészlevet 8%-os HCl hozzáadásával pH = = 3,5 értékre állítjuk be, majd 30%-os butanollal kétszer extraháljuk. 60 65 A szerves extraktumokat vákuumban 45 °C hőmérsékleten az eredeti térfogat 1/10 részére koncentráljuk, kevés, pH = 3,5 értékű vízzel mossuk, majd tovább koncentráljuk. A koncentrált oldatot alacsony hőmérsékleten állni hagyjuk 10—15 óra hosszat, miután a 3
