171719. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új antibiotikum előállítáásra
17 171719 18 4. példa A tiszta antibiotikum kinyerése vékonyrétegkromatográfia segítségével. Az elemző vékonyrétegkromatográíiánál a 3. példa szerint előállított antibiotikum színfoltjai az indulópontnál maradnak, az antibiotikum a legfelső zónában van (futtató elegy: 5: 1 arányú kloroform—metanolelegy; F 254 jelű Kieselgel-lemezek, gyártja: Merck, Darmstadt, NSZK). 1,00 g nyers antibiotikumot 20 db Kieselgel-lemezen (Merck F 254, 2 mm) preparatív vékonyrétegkromatográfiának vetünk alá (futtató elegy: 5: 1 arányú kloroform—metanol-elegy). A legfelső, ultraibolya világítással láthatóvá váló zónát elkülönítjük. Hozam: 344 mg. A termék Escherichia coli ATCC 9637 elleni aktivitása (lemez-teszt) a nyers termék aktivitásának 152%-a. 5. példa A tiszta antibiotikum kinyerése oszlopkromatográfia segítségével. A 3. példa szerint kapott nyers antibiotikum 10 g-ját 600 ml kétszer desztillált vízben oldjuk, majd 70 cm hosszú, 5 cm átmérőjű, acetilezett polikaprolaktámmal (MN-Polyamid SC—6 AC; gyártja a Macherey cég, Düren, NSZK) töltött oszlopon szűrjük. Csak a 67 nmnél abszorbeáló frakciókat felfogjuk. A főfrakciót kloroformmal extraháljuk, a kloroformos oldatot bepároljuk, és a maradékot 0,01 Hgmm nyomáson és 60 °C hőmérsékleten 4 napon át szárítjuk. Hozam: 5,2 g. A termék Escherichia coli ATCC 9637 elleni aktivitása (lemez-teszt) a nyers termék aktivitásának 148%-a. 6. példa A tiszta antibiotikum kinyerése frakcionált kicsapással. A 3. példa szerint kapott antibiotikum 1,00 g-ját 100 ml acetonban oldjuk és az oldatot centrifugálással derítjük. Az oldathoz adagonként ciklohexánt adunk, és a kivált csapadékot centrifugálással elkülönítjük. Ciklohexán adagolás ml Csapadék mg Hatékonyság + 10 43 69 + 28 125 119 + 17 182 135 + 25 157 109 + 60 120 115 * Lemez-tesztben Escherichia coli ATCC 9637 ellen. A fent leírt frakcionált kicsapást az oldószeres szisztematikus variálásával tovább finomíthatjuk. A tisztított antibiotikum az alábbi elemzési adatokat adja: C 50,8%; H 7,2% ; O 42,0% ; Az adatok pontossága +1%. A példákban említett lemez-tesztet az alábbiak szerint végezzük (vö.: P. Klein, Bakteriologische Grundlagen 5 der Chemotherapeutischen Laboratoriumspraxis, Springer kiadó, Göttingen [1957], 86. old.). Escherichia coli ATCC 9637 által fertőzött agar-lemezbe lyukakat sajtolunk. A vizsgálandó anyagot oldat alakjában a lyukakba adjuk, majd a lemezt 37 °C-on 10 mintegy 16 órán át inkubáljuk. A hatékony vegyületek körül olyan zónák alakulnak ki, amelyekben a növekedés gátolt. A zónák méretétől az antibiotikum mennyiségére következtethetünk. 15 Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás Gram-pozitív és Gram-negatív baktériumok ellen hatékony antibiotikum előállítására — mely antibiotikum 20 (a) tapasztalati összegképlete C58 H 98 0 36 , (b) molekulasúlya 1370, (c) az 1. ábrán feltüntetett ultraibolya színképpel, a 3. ábrán feltüntetett infravörös színképpel és a 2. és 4. ábrán feltüntetett magrezonancia színképpel ren-25 delkezik, (d) vízben, rövidszénláncú alkoholokban, kloroformban és acetonban oldódik, dietiléterben, petroléterben és ciklohexánban nehezen oldódik, (e) semleges anyagot képez és elektroforetikus mezőben 30 nem vándorol, (d) savas hidrolíziskor redukáló cukrokat ad, azzal jellemezve, hogy a CBS 432.74 számú Actinoplanes törzset vagy a CBS 434.74 számú Actinoplanes törzset vagy e két törzset együttesen aerób feltételek mellett 35 asszimilálható szén- és nitrogénforrást és ásványi sókat tartalmazó tápközegben tenyésztjük, majd az antibiotikumot a tenyészléből és/vagy a micéliumból vízzel elegyedő szerves oldószerrel végzett extrakció útján elválasztjuk és extrakciós, kicsapásos és/vagy kromatográ-40 fias eljárások segítségével izoláljuk és tisztítjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a tenyésztést 20—40 °C-on végezzük. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási mód-45 ja, azzal jellemezve, hogy beoltás előtt a tápközeg pH értékét vagy pedig a növekvő tenyészet pH értékét 6—8 értékre állítjuk be. 4. Az 1. igénypont szerinti eljárás továbbfejlesztése baktériumellenes gyógyszerek előállítására, azzal jelle-50 mezve, hogy az 1. igénypont szerint előállított antibiotikumot a gyógyászatban szokásos hordozó-, vivő- és segédanyagokkal elkeverjük és gyógyászati készítménynyé alakítjuk. 5. Az 1. igénypont szerinti eljárás továbbfejlesztése az 55 állati növekedést serkentő és a takarmány kihasználását fokozó készítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerint előállított antibiotikumot hordozó és segédanyagokkal és/vagy takarmányadalékokkal összekeverjük. 3 lap rajz A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 78.6120.66-42 Alföldi Nyomda, Debrecen — Felelős vezető: Benkő István igazgató
