171718. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új antibiotikum előállítáásra
5 171718 6 savval láthatóvá tegyük. Néhány jellegzetes színreakciót az alábbi táblázatban adunk meg. Reagens Szín Háttér színe 10% H2 S0 4 barna fehér jód barna barna-sárga molibdátofoszforsav kékeszöld halványzöld ezüstnitrát—NH3 barna világosbarna timol—H2 S0 4 piroslila színtelen dimedon—H3 P0 4 zöld (Ul-fényben sárga) színtelen ánizsaldehid—H2 S0 4 zöld színtelen vanillin-HC104 barna színtelen A reagenseket a szokásos módon [E. Stahl, Dünnschichtchromatographie, Springer kiadó Berlin, Heidelberg, New York (1967), 2. kiadás] készítettük. (12) A találmány szerinti antibiotikum Rf értékeit különböző futtató elegyek esetében az alábbi táblázat szemlélteti. Adszorbens: Kieselgel-lemez (gyártja: Merck, Darmstadt, NSZK) Etalon: eritromicin-bázis. Futtató elegy AntibioEritromicintikum bázis Rf Rf kloroform 4- metanol 95 + 5 0,00 0,00 90 + 10 0,27 0,08 80 4-20 0,59 0,21 50 4-50 0,85 0,26 kloroform 4- metanol + ammónia* 40 4-6 4- 1 0,34 0,62 metanol 0,83 0,25 butanol 4-jégecet 4- víz 60 4- 20 4-20 0,55 0,39 * 25%-os vizes oldat. A 3. ábrán látható 'H magrezonancia-spektrumot 220 MHz-nél az antibiotikum deuterizált kloroformmal készített oldatában vettük fel, amikor is belső etalonként tetrametilszilánt alkalmaztunk. Mérőműszer: HR—SC típusú spektrométer (gyártja: Varian Associates, Kalifornia, USA). A 4. ábra szerinti 13 C magrezonancia-spektrumot a fent megadott oldatban, 25,2 MHz-nél protonzaj-csatolásmentesítéssel vettük fel. Mérőműszer: XL—100 típusú, 15"-os spektrométer (gyártja: Varian Associates, Kalifornia, USA). Az infravörös spektrumban fellépő sávokat s, m és w betűkkel jelöltük. Az s-intenzitású sáv intenzitása a spektrum legerősebb sávja intenzitásának legalább 2/3-a. Az m-intenzitású sáv intenzitása a legerősebb intenzitás 1/3-a—2/3-a, míg a w-intenzitású sáv intenzitása a legerősebb intenzitás 1/3-át sem éri el. A fenti becslések a százalékos átbocsátás alapján készültek. Meglepő módon a fenti Actinoplanes-törzsek termelik az új antibiotikumot, amelyet jó hozammal izolálhatunk a tenyész-közegből. Meglepő továbbá, hogy a találmány szerint előállítható antibiotikum erős mikroba-elleni, főleg baktérium-elleni és ezen belül Gram-negatív kórokozók elleni hatást mutat anélkül, hogy az ismert antibiotikumok fent említett hátrányait mutatná. Az új antibiotikumnak továbbá az a meglepő tulajdonsága van, 5 hogy állatoknál a növekedést gyorsítja és a takarmány kihasználását fokozza. A találmány szerinti antibiotikum tehát a gyógyászatot és a technikát gazdagítja. A találmány szerinti eljárásban CBS 432.74 és CBS 434.74 számú Actinoplanes-törzseket alkalmaztunk. 10 A találmány szerinti eljárásban alkalmazható CBS 432.74 és CBS 434.74 Actinoplanes törzsek a Schizomycetes osztályhoz, az Actinomycetales rendhez, az Actinoplanaceae családhoz és az Actinoplanes fajhoz tartoznak. A CBS 432.74 számú törzset talajból izoláltuk. 15 A CBS 434.74 törzs a CBS 432.74 törzs spontán mutációjának az eredménye. Mindkét törzsre az alábbiak jellemzők. A micélium 0,3—1,3 [i széles és elágazott. A spóratokok szabálytalan alakúak, körvonaluk megközelítőleg 20 gömb alakú, felületük azonban púpos; átmérőjük 5— 18 y.. A spórák gomb- vagy ellipszoid-alakúak, ostort hordanak. A spórák gyors mozgásúak, átmérőjük 0,7— 1,3 (X, a spóratokokban hullámos, göndörödött láncok alakjában helyezkednek el. 25 Különböző táptalajokon tenyésztve (20—30 c C-on) 14 nap elteltével az alábbi jellegzetességeket figyelhetjük meg: Czapek-agar növekedés jó, illetve igen jó 30 szubsztrát-micélium narancsszínű oldható pigment enyhén barnás-sárga spóratok 4- ; micéliumfelület vékonyan harmatos. CPC (Casa- növekedés jó, illetve igen jó 35 mino-pepton- szubsztrát-micélium narancsszínű-na-Czapek-agar) rancsbarna oldható pigment: barna spóratokok 4- 4-, micéliumfelület vékonyan harmatos. 40 tej-agar növekedés jó, illetve igen jó szubsztrát-micélium- narancsszínű oldható pigment: aranybarna spóratokok: 4-4-, micéliumfelület véko^ nyan harmatos 45 kazein peptonizálva Tirozin-agar növekedés közepes, néha jó szubsztrát-micélium: barna oldható pigment: barna spóratokok: —•; micélium-felület részben 50 harmatos, a tirozin-kristályok nem oldódtak. Melanin-képződés: pozitív. A tej peptonizálása: pozitív. 55 Jelmagyarázat: 4- sok spóratok; 4- 4- igen sok spóratok; — spóratokok nincsenek. A CBS 434.74 jelű törzs abban különbözik a CBS 60 432.74 jelű törzstől, hogy az előbbi több antibiotikumot termel. A találmány szerinti eljárásban szilárd, félig szilárd vagy folyékony tápközegeket alkalmazhatunk. Előnyösen vizes, folyékony tápközegeket használunk. 65 A tápközegeket általánosan ismert módszerek szerint 3
