171659. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás ergolinvázas alkaloidok kinyerésére és szelektív elkülönítésére
171659 7 8 A szárazmaradékot 0,5 liter kloroformban oldjuk, majd 0,05 liter 5%-os ecetsavat tartalmazó vízzel kirázzuk. A két fázist elválni hagyjuk, majd a kirázást háromszor 0,5 liter 5%-os ecetsavat tartalmazó vízzel megismételjük. A vizes fázisokat egyesítjük. Az ergometrint tartalmazó híg ecetsav oldat pH-értékét tömény ammóniumhidroxid oldattal 9-re állítjuk be, majd 0,1 liter kloroform-izopropanol 4:1 arányú elegyével kirázzuk. A két fázist elválni hagyjuk majd a vizes fázist a fenti arányú és összetételű oldószereleggyel kétszer újból kirázzuk. A szerves fázist, amely az ergometrin bázist tartalmazza ismert módon dolgozzuk fel, csökkentett nyomáson oldószermentesre pároljuk be. 0,3 g maradékot kapunk, amelyből maleinsavval ismert módon közvetlenül leválasztjuk az ergometrin-maleátot, amelyet vízmentes etanolból átkristályosítunk. Kitermelés: 0,20 g (74,0%) ergometrin-maleát. Tisztasága az USP XVIII. előírásainak megfelel. Az ergotamint tartalmazó és 5%-os ecetsavval kivonatolt kloroformos fázist 0,3 liter tömény ammóniumhidroxid oldattal kirázzuk, a két fázist elválni hagyjuk, majd a kirázást azonos térfogatú ammóniumhidroxid oldattal megismételjük. Az ily módon tisztított kloroformos fázist ezután 50 C°-on szárazra pároljuk. A továbbiakban ismert módon járunk el és végtermékként ergotamin-tartarátot kapunk. Kitermelés: 2,70 g (86,9%) ergotamin-tartarát. Tisztasága az USP XVIII. előírásainak megfelel. 2. példa 10 liter Claviceps paspali tenyészetből az alkaloidokat tartalmazó micéliumot nyomószűrővel kiszűrjük és ULTRATURAX mikronizálóval homogenizáljuk. Ezután erős keverés mellett 4 liter etilacetát és 0,2 liter tömény ammóniumhidroxid oldat elegyével kivonatoljuk. A kivonatolt micéliumot kiszűrjük, majd a műveletet kétszer 2 liter etilacetáttal megismételjük. Az etilacetátos kivonatokat egyesítjük, majd 50 C°-on, csökkentett nyomáson oldószermentesítjük. 20 ml sűrűn folyós maradékot kapunk, amelyet 0,1 liter etanol, 0,05 liter jégecet és 0,05 liter víz elegyében feloldunk, majd az oldatot 0,25 liter ciklohexánnal kirázzuk. A két fázist elválni hagyjuk. Az alkaloidokat tartalmazó, alsó vizes fázis pH-értékét tömény ammóniumhidroxid oldattal 9-re állítjuk, ezután 0,2 liter kloroform-izopropanol 4: 1 arányú elegyével kivonatoljuk, a két fázist elválasztjuk. A kloroform-izopropanolos fázist 50 e'en csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. 4,3 g szárazmaradékot kapunk. A szárazmaradékot 0,5 liter kloroformban oldjuk, majd 0,1 liter 5%-os ecetsavat tartalmazó vízzel kirázzuk. A két fázist elválni hagyjuk, majd elválasztás után a kloroformos fázis kirázását háromszor 0,05 liter 5% ecetsavat tartalmazó vízzel megismételjük. A vizes fázisokat egyesítjük. Az elimoklavint tartalmazó híg ecetsav oldat pH-értékét tömény ammóniumhidroxid oldattal 9-re állítjuk be, majd 0,9 liter kloroform-izopropanol 4:1 arányú elegyével kirázzuk. A két fázist elválni hagyjuk, majd a vizes fázist 4X0,1 liter fenti arányú és összetételű oldószereleggyel újból kirázzuk. A kloroformizopropanolos fázisokat egyesítjük és 50 C°-on, csökkentett nyomáson 10 ml-re besűrítjük, miközben az elimoklavin kikristályosodik. A kristályokat tartalmazó sűrítményt 24 óráig +5 Cc -on hűtőszekrényben állni hagyjuk, a kivált kristályokat leszűrjük, 5 ml hideg 5 kloroformmal mossuk, 40 C°-on szárítjuk. 2 g nyers elimoklavint kapunk. A terméket 100 ml metanolban forralás közben feloldjuk, majd frakcionált módon kristályosítjuk. Kitermelés: 1,5 g elimoklavin. 10 Op.: 254 C° (bomlik) [«]*> = -150°, (c = 1, piridin). Az agroklavint tartalmazó és 5%-os ecetsavval kivonatolt kloroformos fázist 0,3 liter tömény ammóniumhidroxid oldattal kirázzuk, a két fázist elválni hagyjuk. 15 A kloroformos fázist 50 C°-on szárazra pároljuk. A szárazmaradék súlya: 1,5 g. A szárazmaradékot 20 ml kloroformban oldjuk, majd 20 g 0,5 mm szemcsenagyságú, Woelm gyártmányú szilikagél oszlopon kromatografálással tisztítjuk. Eluáló oldatként 100 tf kloroform, 20 0,5 tf víz és 10 tf etanol elegyét alkalmazzuk. 10 ml-es frakciókat szedünk, az agroklavint tartalmazó frakciókat egyesítjük, majd 50 C°-on, csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. 1,0 g nyers agroklavint kapunk. A terméket 50 ml acetonban oldjuk, majd frakcionált 25 kristályosítással tisztítjuk. Kitermelés: 0,8 g agroklavin. Op.: 205 C° [a]2 D ° = -154°, (c = 1, kloroform.) 30 3. példa Az 1. példa szerint járunk el, azzal a változtatással, hogy 6 liter dietilkarbonát és 0,4 liter tömény ammóni-35 umhidroxid oldat elegyével kivonatolunk. A kivonatolt drogot leszűrjük, majd a műveletet háromszor 2 liter dietilkarbonáttal megismételjük. 0,21 g ergometrin-maleátot és 2,68 g ergotamin-tartarátot kapunk, mindkét termék tisztasága kielégíti az 40 USP XVIII. követelményeit. 4. példa 45 Az 1. példa szerint járunk el, azzal a változtatással, hogy a kivonatolás során kapott 103 g sűrűn folyós maradékot etanol-jégecet-víz elegye helyett 0,05 liter metanol, 0,03 liter monoklór-ecetsav és 0,07 liter víz elegyében oldjuk fel, majd az oldatot ciklohexán he-50 lyett metil-ciklohexánnal kivonatoljuk. 0,19 g ergometrin-maleátot és 2,73 g ergotamin-tartarátot kapunk; mindkét termék tisztasága az USP XVIII. előírásainak megfelel. 55 5. példa Mindenben az 1. példa szerint járunk el, azzal a változtatással, hogy a kivonatolás során kapott 99,5 g sűrűnfolyós maradékot etanol-jégecet-víz elegye he-60 lyett 0,1 liter etanol, 0,5 liter tömény hangyasav és 0,05 liter víz elegyében oldjuk fel, majd az oldatot ciklohexán helyett n-hexánnal kivonatoljuk. 0,20 g ergometrin-maleátot és 2,69 g ergotamin-tartarátot kapunk; mindkét termék tisztasága az USP 65 XVIII. előírásainak megfelel. 4
