171512. lajstromszámú szabadalom • Eljárás nikotinamid-adenin-dinukleotid-származékok előállítására
171512 8 zetre. Az oldat pH-ját 1 n nátriumhidroxid-oldattal 11,2-re állítjuk be és 75 C°-on melegítjük 1 órán át, majd lehűtjük szobahőmérsékletre az V általános képletű vegyület előállítása érdekében. A szerkezetet ezúttal is ultraibolya spektrumból álla- 5 pítottuk meg. Ezután 3 mól TRIS puffer-oldatot adunk az eredeti oldathoz és 6 n sósavval beállítjuk a 7,5 pH-t, és végül 0,5 ml acetaldehidet és 100 jtd alkohol dehidrogenáz szuszpenziót adunk hozzá 10 4,8 n ammóniumszulfátban oldott élesztő formájában (29,4 mg enzim/ml oldat koncentrációval). Az oldatot 6 n sósavval megsavanyítjuk, míg elérjük a 3-as pH értéket. Ezután 10 térfogatrész 15 acetont adunk 'hozzá és egy éjszakán át tartó -20 C°-os ülepítés után kapott olajos csapadékot 100 ml kétszer desztillált vízben oldjuk, 1 n nátriumhidroxid-oldattal beállítjuk a 8-as pH értéket, majd 40 ml DOWEX 21 K karboxil anioncserélő- 20 gyantát tartalmazó kromatográfiás oszlopra visszük föl. Először 100 ml kétszer desztillált vízzel, majd 0,075 mól hangyasav-oldattal hígítjuk az oldatot, míg a hígított termék kb. 260 mju körül abszorp- 25 ciós csúcsot nem mutat. Az ezután következő eluálás 0,2 mól hangyasavval történik, amelynek révén a VI általános képletű NAD-származékot állítjuk elő, amelyet 30 tiszta állapotban liofilizáló koncentrálás, 10 térfogatrész acetonnal való lecsapás, egy éjszakán át tartó -20 C°-os ülepítés és centrifugálás után kapunk meg. A termék infravörös spektruma Nujolban (tiszta paraffinolaj) 1750cm_1 -nél sávot mutat, mely a NAD spektrumából hiányzik. 5. példa 35 40 A VI általános képletű nikotinamid-6-(2-hidroxi-3--karboxipropilamino)-purin-dinukleotid (R = H) előállítása V általános képletű 45 dihidronikotinamid-6-(2-hidroxi-3-karbornetoxipropilamino)-purin-dinukleotidból (R = CH3 ). 1 g dihidronikotinamid 6-(2-hidroxi-3-karbometoxi-propilamino)-purin-dinukleotid (V általános képlet, R = CH3) 15 ml kétszer desztillált vízben való oldatához 0,5 n nátriumhidroxid alkoholos oldatából 15 ml-t adunk. Az elegyet 30 percig 75 C°-on melegítjük. Ezután azonnal lehűtjük és az enzimes oxidációt, valamint a befejező műveleteket a 3. példa szerint végezzük. Az így nyert termék fizikai-kémiai (UV és NMR) állandói megegyeznek a 3. példa szerinti termék adataival. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás a VI általános képletű nikotinamid-adenin-dinukleotid-származékok előállítására — ahol R jelentése hidrogénatom vagy rövidszénláncú alkil-csoport és R' jelentése ribóz-csoport - az adenin csoporton levő 6-os helyzetű amino-csóport funkciós csoporttá alakítása útján, azzal jellemezve, hogy valamely II általános képletű nflcotinamid-adenin-dinukleotidot — ahol R' jelentése ribóz-csoport — valamely I általános képletű sav- vagy észterepoxiddal -ahol R jelentése hidrogénatom, vagy rövidszénláncú alkil-csoport - 0 C° és 50 C° között, vízzel elegyedő oldószer vagy ezek keverékének jelenlétében, perklórsav adagolásával 6-os pH érték beállítása mellett reagáltatunk, a kapott III általános képletű vegyületet - melyben R' jelentése ribóz-csoport és R a fenti jelentésű — redukálószerrel redukáljuk, a kapott IV általános képletű vegyületet — ahol R' és R a már megadott jelentésű- 5-80 C°-on és 7—11,5 pH között kezelve V általános képletű vegyületté - ahol R' és R jelentése a fenti- alakítjuk át, majd az így nyert V általános képletű vegyületet önmagában ismert módon enzimatikusan oxidáljuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a reakciót a II általános képletű vegyülettel — ahol R' jelentése az 1. igénypontban megadott — szobahőmérsékleten folytatjuk le. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a IV általános képletű vegyületet - ahol R és R' az 1. igénypontban megadott jelentésű, 75 C°-on és 11,2 pH érték mellett kezeljük. 2 rajz A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 784514 - Zrínyi Nyomda
